PODSTAWY BIOTECHNOLOGII

BIOTECHNOLOGIA FARMACEUTYCZNA (2h)

1.

Działanie antybiotyków na wybrane szczepy drobnoustrojów (test płytkowo –

dyfuzyjny)

a)

Na powierzchnię płytki Petriego z bulionem agarowym wysiać powierzchniowo 0,2

cm

3

hodowli drobnoustrojów (E. coli lub Bacillus sp.). Zawiesinę bardzo dokładnie

rozprowadzić głaszczką po powierzchni podłoża.

b)

Po ok. 10 min. na powierzchni podłoża umieścić 4 krążki bibułowe nasączone

różnymi antybiotykami. Na denku płytki zaznaczyć rodzaj antybiotyku na
poszczególnych krążkach.

c)

Wstawić płytki do termostatu (nie obracać do góry dnem).

d)

Po okresie inkubacji odczytać wyniki. Określić wrażliwość drobnoustrojów na

poszczególne antybiotyki poprzez pomiar wielkości strefy zahamowania wzrostu przy
poszczególnych krążkach.

2. Określenie mocy antybiotyku (test otworów w agarze)

a)

Na powierzchnię płytki Petriego z bulionem agarowym wysiać powierzchniowo 0,2
cm

3

hodowli drobnoustrojów (E. coli lub Bacillus sp.). Zawiesinę bardzo dokładnie

rozprowadzić głaszczką po powierzchni podłoża.

b)

Po upływie 10 min. wyciąć korkoborem (przestrzegając ściśle warunków

jałowości) 4 otwory o średnicy 5 mm.

c)

Otwory napełnić, przy pomocy zakraplacza, poszczególnymi roztworami

antybiotyku o różnym stężeniu. Na denku płytki zaznaczyć stężenie antybiotyku w
poszczególnych otworach.

d)

Po okresie inkubacji odczytać wyniki. Określić moc antybiotyku poprzez pomiar

wielkości strefy zahamowania wzrostu drobnoustrojów przy poszczególnych
otworach.

3. Test pasmowy – określenie spektrum działania antybiotyku

a)

Sterylny, stalowy cylinderek nałożyć jałowo na środek wylanej i zestalonej na płytce
Petriego pożywki agarowej, lekko docisnąć. Cylinderek napełnić roztworem badanego
antybiotyku.

UWAGA !!! Ostrożne poruszać płytką aby nie przesuwać cylinderka.

b)

Za pomocą ezy promieniście do cylinderka szczepić drobnoustroje testowe (od 1 do

3).

c)

Na denku płytki podpisać drobnoustroje.

d)

Po okresie inkubacji określić, które drobnoustroje nie rozwinęły się, co oznacza, że

antybiotyk wpływa hamująco na ich rozwój.

Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania w zeszycie

ćwiczeniowym.