Biol mol kom cz 3

background image

Kaseta z negatywami

Głowica

z preparatem

Działo elektronowe

Ekran fluorecencyjny

Kamera

Apertura

Apertura

Transmisyjny mikroskop elektronowy (TEM)

background image

UTRWALANIE

DEHYDRATACJA

PRZESYCANIE ŻYWICĄ

ZATOPIENIE W ŻYWICY

KROJENIE ULTRACIENKICH SKRAWKÓW

KONTRASTOWANIE

background image

M

M

M

M

background image
background image
background image
background image

szary

srebrny

złoty

purpurowy

niebieski

60

nm

90

150

190

240

nm

nm

nm

nm

skrawki używane do mikroskopu
elektronowego

Rys. Zależność pomiędzy grubością skrawka a jego barwą interferencyjną

background image
background image
background image
background image
background image
background image
background image
background image
background image
background image
background image
background image

SEM of a Flower Spike

Note the great depth of field

background image

Same stereocilia as in previous slide viewed using
Nomarski optics (B) and TEM (C ).

background image

In situ metody pozwalające lokalizować kwasy
nukleinowe.

background image

In situ

i in vivo

detekcja of DNA

i RNA:

Fluorescencyjna

in situ hybrydyzacja

(FISH)

Fluorescencyjne

barwniki takie jak: DAPI,

IP, TOTO

GFP konstrukty białek

związanych z chromatyną

takich jak histony.

In situ i in vivo

eksperymenty z użyciem

BrdU

In situ wykrywanie

transkrypcji z użyciem

BrUTP, Cy3-UTP..

Fluorescencyjna

in vivo hybrydyzacja

(FIVH)

Inne metody in situ

takie jak np.

in situ nick translacja

In situ PCR

i in situ RT PCR

background image

In situ

i in vivo

detekcja of DNA

i RNA:

Fluorescencyjne

barwniki takie jak: DAPI,

IP, TOTO

background image

In situ

i in vivo

detekcja of DNA

i RNA:

Fluorescencyjne

barwniki takie jak: DAPI,

IP, TOTO

background image

Cięcie optyczne

z

x

y

background image
background image

Nucleoli

background image

Mitochondria &
plastids

background image

In situ

i in vivo

detekcja of DNA

i RNA:

In situ i in vivo

eksperymenty z użyciem

BrdU

In situ wykrywanie

transkrypcji z użyciem

BrUTP, Cy3-UTP..

background image

In situ lokalizacja transkrypcji
inkubacja z

Br UTP

- Lupinus luteus

background image

In situ localization of transcription

Br UTP

incubation - Lupinus luteus

background image

In situ localization of transcription

Br UTP

incubation - Lupinus luteus

background image

In situ localization of transcription

Br UTP

incubation - Lupinus luteus

background image

In situ localization of transcription

Br UTP

incubation - Lupinus luteus

background image

Solovei et al.. 2001

In situ

i in vivo

detekcja of DNA

i RNA:

GFP konstrukty białek

związanych z chromatyną

takich jak histony.

background image

In situ

i in vivo

detekcja of DNA

i RNA:

Fluorescencyjna

in situ hybrydyzacja

(FISH)

background image

A whole-mount in situ hybrydyzacja (WISH)

i in situ hybridization w całych komórkach.

In situ hybridization półcienkie skrawki.

background image

Przygotowanie materiału

background image

Półcienkie skrawki

W komórkach roślinnych i zwierzęcych błona komórkowa a w
komórkach roślinnych ściana komórkowa są barierami, które nie
pozwalają na swobodną penetracje przeciwciał do wnętrza
komórki gdzie znajdują się poszukiwane antygeny.

Najczęściej stosowany sposób – uzyskanie półcienkich
skrawków.

Zalety:
*Idealny do badań tkankowych – zachowany układ komórek w
tkance.

Wady:
*Obserwacja tylko fragmentu komórki.
*Pracochłonna technika.
*Możliwość utraty lub zablokowania części antygenów podczas
preparatyki materiału.

background image

Szukana sekwencja
DNA lub RNA

Bufor hybrydyzacyjny

Znakowane sondy

półcienki skrawek
0.1

m – 0.1 mm

Szkiełko podstawowe

Błona komórkowa

Półcienkie skrawki

background image

Półcienkie skrawki

Skrawki paraffinowe

Inne usuwalne

żywice: BMM, PEG,

Technovit.....

Cryo-skrawki

Vibroskrawki

background image

Vibratom:

Skrawki - aż do 100 m (0.1

mm)
Przez kilka minut materiał
„żywy”

background image

a

b

c

wz

ch

n

m

p

m

ł

p

o2

o1

Ovary

background image

Jak dotrzeć do wnętrza komórki: microiniekcja

Kontrast fazowy:
obraz komórki

Podczas iniekcji
przeciwciał.

background image

Permeabilizacja błon komórkowych, izolacja protoplastów:

Permeabelizacja

:

-Detergent (Triton X 100)

-Electroporacja
-Streptolysin O
-Scrape-loading
-Wielokrotne zamrażanie
-Peptidemediated
membrane transfer

Enzymatyczne lub chemiczne trawienie
Ściany komórek roślinnych
:
pektynaza, celulaza maceroenzym....

-Żywe komórki pH 5.4-5.8, temp. ~23

O

C

-Komórki utrwalone pH 4.6-4.8, temp. 37

O

C

background image
background image

Hipertonic solution

Plasmolysis of intact plant cells can be
used to facilitate the passage of DNA

Electroporation can then be used to transfer
the macromolecules into plant cells.

Fang-Sheng   et al. 2001


Document Outline


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Biol kom cz 1
Biol kom cz 4
Biol kom cz 6
Biol kom cz੠2
Biol kom cz 5
Biol kom cz 2
Biol kom cz 1
Biol Mol wyklad 9
Sp asp proc kom cz VII 2010
seminaria biol mol onkogeneza, Płyta farmacja Poznań, III rok, Biologia molekularna, 2009, sem 6
biol mol
Test z biol.mol 2011, UG, MOLEKUŁY, biologia molekularna
pytania biol mol moje(2)
Wykład biol mol ze Strzałką nr 2
Pod Biol Mol i Biotech cw1, Studia
biol mol zadanie domowe3
biol mol kol 2 2
biol mol chyba to samo
biol mol 2014 e

więcej podobnych podstron