AKTYWNOŚĆ LIMFOCYTÓW T

Odporność organizmu:



komórkowa



charakteryzuje się gromadzeniem

wokół antygenu komórek, głównie limfocytów T,

które bezpośrednio reagują z antygenem, a

poprzez m.in. wydzielanie substancji zwanych

limfokininami wciągają do odpowiedzi

immunologicznej także makrofagi oraz granulocyty.



humoralna



polega na wytwarzaniu i uwalnianiu

do płynów środowiska organizmu przeciwciał;

wiąże się ona z czynnością limfocytów B.

Odporność

organizmu

Różne rodzaje odporności

swoistej

czynna

biern
a

natural
na

sztuczn
a

natural
na

sztuczn
a

(przebyte

choroby

zakażenia)

(szczepienia

ochronne)

(przeciwciała

matki

przekazywan

e przez

łożysko

matki)

(surowice

odpornościowe

np.

przeciwtężcow

przeciwjadowa

)

Populacje

limfocytów

20-40% leukocytów krwi

obwodowej

Identyfikacja limfocytów

T i B

za pomocą

receptorów, antygenów różnicowania-

TCR

CD2
CD3
CD4+
CD8+
CD28
CD40L

MHC kl.I i II

BCR

CD19
CD20
CD32
CD35
CD40
CD80

MHC kl.I i II

6-10m

Rozwój limfocytów T



Powstają w

czerwonym szpiku kostnym

wędrują do

grasicy,

gdzie ulegają proliferacji



Grasica

jest narządem, w którym dojrzewające

limfocyty T (

tymocyty

)



przechodzą

selekcję grasiczą

(selekcja mającą na celu wyeliminowanie

autoreaktywnych

limfocytów

mogące uszkodzić

własne tkanki



występujące w organizmie niewielkie ilości

limfocytów

T γδ

przechodzą słabo zbadane

procesy

selekcji pozagrasiczej

umiejscowione

w skórze oraz błonach śluzowych jelit i jamy

otrzewnej.

Funkcje limfocytów



Odgrywają trzy zasadnicze funkcje:



wspomagają

odpowiedź odpornościową -

subpopulacja limfocytów

(CD2+,CD3+,CD4+)



pełnią funkcję

cytotoksyczną

subpopulacja limfocytów

(CD2+,CD3+,CD8+)



regulują

odpowiedź odpornościową-

hamując - subpopulacja limfocytów

Treg,

dawniej (Ts)

(CD2+,CD3+,CD4+ ,CD25+,CD8+)



Powstają i dojrzewają w szpiku czerwonym



Subpopulacje:

- B1a, B1b

- B2

Funkcja:

- wytwarzają przeciwciała (immunoglobuliny),

które łączą się z antygenem

LIMFOCYTY B

Testy rozetowe



Wykonanie testu



Rozetki E

Limfocyty T wiążą erytrocyty barana i

tworza formy rozetowe E. Izolowane limfocyty inkubuje się

z 0,5% zawiesiną erytrocytów barana w czasie 30-60min

w temperaturze pokojowej. Rozetki liczymy pod

mikroskopem.



Rozetki wczesne

- dla limfocytów bardzo szybko

wiążących



Rozetki późne

–

powstające po paru godzinach



Rozetki EA

- do limfocytów dodajemy erytrocyty

baranie, surowicę, wykonanie w podobnych warunkach



Rozetki EAC

zastosowanie amboceptora

hemolitycznego, krwinek barana i dopełniacza/mysi/,

wykonanie w podobnych warunkach



Test rozet E

– wykrywanie receptorów dla

krwinek barana,

CD2 na limfocytach T



Test rozet EA

– wykrywanie receptorów

dla fragmentu Fc IgG,

RII na

limfocytach T i B



Test rozet EAC

– wykrywanie receptorów

dla składników dopełniacza,

CR1 i CR2

na limfocytach B

Testy rozetowe

Rozetki –

normy

Rozetki E wczesne

18%

„

E późne

60-70%

„

20-23%

„

EAC

25%

Technika fluorescencji

jest powszechnie stosowana do

różnicowania komórek na bazie ich immunofenotypu.

Sygnał z detektora

rejestrującego fluorescencję jest prosty do

interpretacji -

obecność fluorescencji

świadczy o obecności na

komórce konkretnego białka

-markery CD

- Cluster Differential.

Uznaje się, że sygnały pochodzące z detektorów
rejestrujących światło rozproszone pod różnym kątem są
źródłem informacji o:
-

0 stopni -

wielkość komórki

- 7-10 stopni -

złożoność komórki

- 90 stopni -

budowa jądra komórkowego

- 90 D -

budowa i gęstość ziarnistości cytoplazmatycznych

Pomiary metodami optycznymi

Cytometria przepływowa

bazuje na zjawisku rozpraszania światła

laserowego przez komórki oraz ich struktury i/lub zjawisku fluorescencji
barwników związanych z przeciwciałami

- w przypadku zastosowania

przeciwciał monoklonalnych sprzężonych z fluorochromem światło lasera o
ściśle określonej długości fali wzbudza konkretny fluorochrom.

Stosując

kilka

długości

fal

kilka

przeciwciał

monoklonalnych z fluorochomami (sondy)

można

jednocześnie dokonywać analizy obecności oraz rozmieszczenia konkretnych
struktur  komórki.  Elementy  optoelektroniczne  dokonują  transformację  fal
świetlnych  na  wartości  potencjału,  którego  wielkość  jest  wprost
proporcjionalna  do  intensywności  fluorescencji  (i  gęstości  struktur).  Inne
elementy optoelektroniczne rejestrują światło rozproszone (światło lasera, nie
fluorescencję)  pod  różnymi  kątami  pozwalając  na  jednoczesną  analizę
wielkości  struktur  oraz  ich  strukturę  (dochodzą  tu  zjawiska  załamania  się  i
odbicia światła które                           w przypadku małych kątów - 0-10
stopni są marginalne a pod większymi - 90 stopni grają dużą rolę).

Rejestruje się również światło rozproszone

pod kątem 90 stopni

i o zmienionej polaryzacji w stosunku do pierwotnej polaryzacji światła lasera
- 90 D (analiza powierzchni struktur). Jest to technika MAPSS(TM) - Multi
Angle

Polarized

ScatterSeparation.

Document Outline