BADANIE
OGÓLNE
KAŁU
Kaszkowiak Joanna, Zarzycka Monika
tech.wet, sem III, grupa A
KAŁ
(inaczej stolec) jest wydaliną przewodu
pokarmowego formowaną w jelicie grubym jako produkt
procesów trawienia. Resztki pokarmowe, które zostają
przesunięte z jelita cienkiego do jelita grubego mają
konsystencję stosunkowo płynną. Dopiero w jelicie
grubym dochodzi do końcowej fazy resorpcji wody i
zagęszczania kału. Ostatecznie jego formowanie
zachodzi w odbytnicy.
Skład kału
· Nie strawione lub nie wykorzystane składniki
pokarmowe jelit – 10% (np. błonnik, złuszczone
nabłonki, niewykorzystane enzymy i soki trawienne,
śluz wydzielany przez gruczoły jelitowe)
· Woda – 75%
· Flora bakteryjna – 15% (w większości niegroźne
bakterie symbiotyczne, lecz w kale rozwijają się też
groźne dla zdrowia drobnoustroje, w tym śmiertelnie
groźne i bardzo zaraźliwe bakterie cholery i duru
brzusznego)
Kał zawiera też znaczne ilości azotu i fosforu.
POBIERANIE MATAERIAŁU DO
BADAŃ
Probówka na kał
Do badania parazytologicznego i
bakteriologicznego próbek kału
(potrzebna ilość materiału wynosi 3 g).
Naczynie na kał dla dużych zwierząt
Naczynie dla prób zbiorczych
z pojemnikiem ochronnym.
Naczynie wewnętrzne należy
zawsze napełniać prawie po brzegi.
Dla miarodajnego wyniku
potrzebna jest pewna minimalna
ilość kału (podana przy
omawianiu każdego badania).
METODYKA BADAŃ
Metodyka pracy opiera się na ocenie
metod wykrywania różnych form
parazytów stosowanych w
poszczególnych Zakładach Higieny
Weterynaryjnej. Przede wszystkim
opisane zostaną metody: flotacji,
dekantacji i sedymentacj.
METODY BADANIA KAŁU:
1. Makroskopowe badanie kału:
Umożliwia wykrycie okiem
nieuzbrojonym całych pasożytów lub ich
fragmentów. Do badania bierze się
próbkę kału i miesza się z 5-10 krotną
ilością wody. Po kilku minutach zlewa się
znad osadu warstwę płynu i ponownie
dolewa się wodę. Czynność tę należy
powtórzyć kilkakrotnie, aż płyn nad
osadem będzie przejrzysty. Osad
przenosi się porcjami na płytki Petriego i
dokładnie przegląda.
•2. Mikroskopowe badanie kału:
• Badanie ma na celu wykrycie w kale cyst, oocyst, lub jaj
pasożytów. Największe znaczenie mają metody dekantacji i flotacji:
• A. FLOTACJA - zasada stosowania polega na wykorzystaniu
roztworów o większej gęstości niż gęstość jaj, larw lub cyst.
Powoduje to, że powinny one jako lżejsze wypłynąć na
powierzchnię.
• Odczynnikiem używanym do tej metody jest nasycony roztwór soli
kuchennej
• Zebrany materiał bada się mikroskopowo pod słabym
powiększeniem.
• B. DEKANTACJA - należy do metod sedymentacyjnych.
Zwiększa szanse wykrycia pasożytów. Wykrywa wszystkie jaja
zarówno "lekkie" jak i "ciężkie", larwy i cysty.
• Grudkę kału rozciera się w probówce z niewielką ilością wody , po
czym dopełnia wodą i pozostawia do opadnięcia osadu. Czynność
powtarza się do uzyskania przezroczystego płynu. Uzyskany osad
wiruje się, a następnie ogląda pod mikroskopem.
• Metodę dekantacji zaleca się do wykrywania np. cięższych
gatunkowo jaj przywr.
Badanie kału na obecność
larw nicieni
• Badanie kału na obecność larw nicieni płucnych:
Wykorzystuje się właściwości larw nicieni
polegające na dążeniu do środowiska wodnego
• Metoda Baermanna: w lejek szklany z nasadzoną
rurką gumową opatrzoną w zaciskacz, wstawia
się sitko metalowe. Całość umocowuje się w
statywie. Na sitku, po uprzednim napełnieniu
lejka wodą, umieszcza się badany kał, zanurzony
do połowy w wodzie. W miarę przenikania do
kału wody larwy osadzają się w rurce gumowej.
Po około 24 godzinach otwiera się zaciskacz i
upuszcza płyn do Płytki Petriego, gdzie szuka się
larw pod dwuoczną lupą.
Badanie śluzu w celu wykrycia
pierwotniaków:
• Materiałem do badań może być śluz z
jamy dzioba i wola, treść jelit.
• W preparatach świeżych śluz bada się
bezpośrednio po pobraniu, na szkiełku
podstawowym. Pod mikroskopem należy
szukać poruszających się pierwotniaków.
• W preparatach barwionych ze śluzu
sporządza się rozmazy na szkiełku.
Preparaty te barwi się metodą Giemsy
lub Pappenheima.
Badanie w kierunku pasożytów
wewnętrznych
PASOŻYTY W KALE
- z uwagi na fakt, że wydalanie pasożytów, larw, jaj i
oocyst nie odbywa się w sposób ciągły, zaleca się
badanie zbiorczych próbek kału z 3 dni (pojedyncze
próbki są wystarczające jedynie w przypadku badania
testem ELISA). W stadach zwierząt (z wyjątkiem świń-
tuczników i drobiu) powinna być pobrana
reprezentatywna liczba wyrywkowo pobranych próbek
(a nie zbiorcza próba od wielu zwierząt).
- próbki kału do badania parazytologicznego powinny
być, o ile to możliwe, pobierane z prostnicy. Jeśli nie,
to powinien to być świeżo oddany kał.
- próbki powinny być umieszczone w szczelnie
zamkniętym opakowaniu i jak najszybciej, najlepiej
schłodzone, przesłane do laboratorium.
- wydalone z kałem pasożyty lub ich fragmenty należy
przesyłać w osobnej próbówce, w postaci natywnej
(bez utrwalania ich w formalinie!) lub z niewielką
ilością płynu fizjologicznego.
- jeśli wysyłka materiału następuje później, powinien on
być przechowywany w chłodziarce. Dzięki temu
żywotność larw pasożytów nie zostanie ograniczona,
natomiast zahamowany będzie dalszy rozwój jaj i
oocyst.
Ocena wyników badań
parazytologicznych
Każde postępowanie diagnostyczne
ma swoje ograniczenia. Jedynie
wynik dodatni badania
(bezpośrednie wykazanie
pasożyta) jest dowodem
zarażenia,
wynik ujemny nie
wyklucza inwazji pasożytniczej
.
Dla wykazania obecności pasożytów
potrzebne są niekiedy wielokrotne
badania.
PIES, KOT, TRZODA CHLEWNA,
DRÓB, ZWIERZĘTA TRZYMANE
W MIESZKANIACH
Metoda flotacji (min. 5g kału)
- jaja tasiemców i nicieni, oocysty
kokcydii (wraz z oocystami
Toxoplasma u kotów)
GADY
Preparat bezpośredni, metoda
flotacji (min. 5 g kału)
- trofozoity wiciowców, trofozoity oraz
cysty orzęsków, trofozoity pełzaków,
jaja przywr, tasiemców i określonych
nicieni, cysty pełzaków, oocysty
kokcydii, jaja tasiemców, nicieni i
wrzęch (Pentastomida).
PRZEŻUWACZE
- jaja tasiemców i nicieni, oocysty
kokcydii, jaja przywr wątrobowych
(Fasciola, Dicrocoelium)
oraz pasożytujących w
przedżołądkach
(Paramphistomum),
larwy nicieni płucnych.
Metoda flotacji, metoda sedymentacji,
larwoskopia (min. 10g kału)
KOŃ
Metoda flotacji, larwoskopia (min. 10g kału)
- jaja tasiemców i nicieni, larwy nicieni płucnych oraz
słupkowców (Strongylidae, Cyathostomidae)
a) słupkowce: na podstawie wyglądu jaj nie można
rozróżnić słupkowców małych
(Cyathostomidae=Trichonematidae) od dużych
(Strongylidae); przy stwierdzeniu słupkowców
żołądkowo-jelitowych terapia jest jed nak zawsze
wskazana
b) Anoplocephala: ponieważ jaja tasiemców są wydalane
w kale w stosunkowo małych ilościach i nie w sposób
ciągły, dokładność badania koproskopowego jest w
tym przypadku niewystarczająca.
Prawdopodobieństwo wykrycia można zwiększyć, jeśli
bada się kilkukrotnie wiele zwierząt w obrębie stada.
JAJA GLIST W KALE
JAJA GLISTY I
WŁOSOGŁÓWKI
GLISTA W WYMIOCINACH
TASIEMIEC W KALE
OOCYSTY KOKCYDII
BADANIE W KIERUNKU NICIENI
PŁUCNYCH
Larwoskopia (met. Baermanna-Wetzela 1)
min. 5g kału
Czułość metody zależy
w bardzo dużym stopniu
od gęstości larw w kale
oraz od stanu ich aktywności.
Z tego powodu ważne jest,
aby przysyłać wystarczającą
ilość materiału.
Badanie w celu stwierdzenia jaj
przywr
Metoda sedymentacji (min. 10g kału)
Często wydalane są b. małe ilości jaj przywr; wydalanie
podlega przy tym dużym wahaniom, szczególnie u
bydła. Ważne jest, aby badana była odpowiednia
ilość kału. Przy podejrzeniu klinicznym zarażenia
Fasciola hepatica oraz ujemnym badaniu
kału, polecane jest
badanie serologiczne (wykrywanie
przeciwciał) surowicy (koń i bydło),
albo mleka (bydło).
WYKRYWANIE ANTYGENU
Wykrywanie antygenu lamblii
(Giardia sp.)
- ELISA (2-3g kału)
Wykrywanie antygenu
Cryptosporidium
- ELISA (2-3 g kału)
Badania
mikrobiologiczne
kału
Próbki kału lub wymazy
z prostnicy badane są
w kierunku patogenów
jelitowych przy użyciu
podłoży wybiórczych
oraz wybiórczo-
namnażających
Wykrywanie patogenów
jelitowych
Badanie hodowlane (1)- kał, wymaz z prostnicy
Badanie hodowlane pozwala na wykrycie
następujących drobnoustrojów:
- Salmonella sp.
- termofilne gatunki z rodzaju Campylobacter (C. jejuni, C. coli)
- Yersinia enterocolitica
- różne, chorobotwórcze lub warunkowo chorobotwórcze dla poszczególnych
gatunków zwierząt, pałeczki z rodziny Enterobacteriaceae (np. Klebsiella
sp., hemolizujące oraz śluzowe szczepy Escherichia coli, Proteus sp.)
- gronkowce koagulazododatnie (Staphylococcus aureus, S. intermedius)
- Pseudomonas aeruginosa
- drożdżaki (przy niefizjologicznym namnożeniu się określane półilościowo)
Ponadto u zwierząt mięsożernych
oceniany jest, w sposób
półilościowy, skład flory
bakteryjnej kału. Wzrost ilości
bakterii Gram-dodatnich lub
Gram-ujemnych może
wskazywać na dysbakteriozę w
jelicie grubym.
WYKRYWANIE PAŁECZEK
SALMONELLA
Badanie hodowlane(1)- kał, wymaz z
prostnicy
Badanie hodowlane próbek kału
ukierunkowane
wyłącznie na wykrycie bakterii Salmonella.
Jako materiał do badania mogą
być użyte również próbki zbiorcze
kału.
WYKRYWANIE LASECZEK
BEZTLENOWYCH (ILOŚCIOWO)
Badanie hodowlane (1)- kał
Wzrost ilości laseczek Clostridium u zwierząt
mięsożernych wskazuje na istniejącą dysbakteriozę.
Poprzez odpowiednie seryjne rozcieńczenie próbek
kału
oraz hodowlę w warunkach
beztlenowych na
podłożach wybiórczych,
określana jest ilość komórek
Clostridium w jednym
Gramie kału.
WYKRYWANIE
ENTEROTOKSYNY
CLOSTRIDIUM PERFRINGENS
ELISA (2)- kał
Enterotoksyna Clostridium perfringens
może powodować biegunkę u psów i
kotów.
ELASTAZA
Elisa (1)- kał (porcja wielkości ziarna grochu)
U psów wykrywana jest kałowa elastaza 1,
która, syntetyzowana w trzustce, uwalniana
jest w trakcie procesów trawiennych wraz z
sokiem trzustkowym do jelita.
Psia elastaza E1 zachowuje
stabilność w środowisku
jelita i może być
przez dłuższy czas
wykrywana w próbkach kału.
STOPIEŃ TRAWIENIA
POKARMU
Badanie mikroskopowe (2)- kał (porcja
wielkości grochu)
Wykrywane są:
-niestrawione składniki pokarmu, znajdujące
się w kale: kryształki kwasów tłuszczowych
(w kształcie igieł), kuleczki tłuszczu, włókna
mięśniowe, skrobia.
Badanie jest możliwe do wykonania u
zwierząt mięsożernych, wszystkożernych
oraz u ptaków
BADANIE
WIRUSOLOGICZNE KAŁU
Badanie w mikroskopie
elektronowym (3)- kał (co
najmniej połowa próbówki
kałowej)
Za pomocą mikroskopu
elektronowego
wykrywane są
i klasyfikowane wirusy
obecne w kale.
KREW UTAJONA W KALE
Chromatografia (2)- kał (1/3 próbówki
kałowej)
Aby nie zafałszować wyniku badania,
na 3 dni przed pobraniem materiału
nie należy podawać zwierzęciu mięsa
DIAGNOSTYKA BIEGUNKI
PROFIL BIEGUNKOWY C
KOT, PIES
kał (co najmniej 1 pełna próbówka kałowa)
Badanie:
- bakteriologiczne kału: badanie hodowlane w
kierunku patogenów jelitowych
- mikologiczne kału: badanie hodowlane,
półilościowe
- parazytologiczne kału: wykrywane są jaja
tasiemców i nicieni, oocysty kokcydii (metoda
flotacji)
- w kierunku Giardia sp.: - wykrywanie antygenu
(ELISA)
KOŃ, PRZEŻUWACZE, ŚWINIA
kał (co najmniej 1 pełna próbówka kałowa)
Badanie:
- bakteriologiczne kału: badanie hodowlane w
kierunku patogenów jelitowych
- mikologiczne kału: badanie hodowlane, półilościowe
- parazytologiczne kału: wykrywane są jaja
tasiemców i nicieni, oocysty kokcydii larwy nicieni
płucnych u koni i przeżuwaczy, jaja przywr
wątrobowych oraz pasożytujących w
przedżołądkach (flotacja, sedymentacja,
larwoskopia)
INNE GATUNKI ZWIERZĄT
kał (2 pełne próbówki kałowe)
Badanie:
- bakteriologiczne kału: badanie hodowlane
w kierunku patogenów jelitowych
- mikologiczne kału: badanie hodowlane,
półilościowe
- parazytologiczne kału: wykrywane są jaja
tasiemców i nicieni, oocysty kokcydii
(metoda flotacji oraz sedymentacji)
BADANIE W KIERUNKU
DROŻDŻAKÓW W PRÓBKACH
KAŁU (ILOŚCIOWE)
Najrozmaitsze czynniki działające
immunosupresyjnie oraz terapia
antybiotykami mogą prowadzić do
tego, że żyjące w jelicie drożdżaki –
szczególnie gatunki z rodzaju
Candida – namnażają się nadmiernie
i wywołują biegunkę. Dlatego, w celu
postawienia rozpoznania niezbędne
jest ilościowe wykrywanie zarazka.
BADANIE W KIERUNKU DROŻDŻAKÓW
W PRÓBKACH KAŁU (ILOŚCIOWE)
Badania:
1. Seryjne rozcieńczanie próbki kału
2. Hodowla na specjalnych podłożach
3. Określenie liczby kolonii i obliczenie
ilości drożdżaków w 1 gramie kału
4. Identyfikacja zarazka
KONIE
C