Aminokwasy i białka

1.Wymień aminokwasy z gr. OH

2.Jakie wiązania stabilizują strukturę drugorzędową białka

3.Na czym polega denaturacja białka

4.Opisz wpływ pH na jonizację bialka

5.Napisz nazwę łańcucha peptydowego COO- V- Gly-Val-Phe-NH3+

6.Opisz chromatografię kolumnową

7.Opisz punkt izoelektryczny

8.COO- Gln-His-Ala-NH3+

9.Opisz chromatografię adsorbcyjną

10.Wymień aminokwasy z pierścieniem aromatycznym

11.Rozkład peptydów na aminokwasy

Odpowiedzi

1.seryna, treonina, tyrozyna

2.peptydowe ze struktury I rzędowej, wodorowe

3.denaturacja białka jest to uszkodzenie struktury II III lub IV rzędowej białka przez takie czynniki fizyczne jak

• Wysoka temperatura

• Wirowanie

• Promieniowanie jonizujące rentgenowskie, nadfioletowe

chemiczne

• Alkohol stężony

• Sole metali ciężkich

• Mocne kwasy i zasady

• Stężenia soli (wysalanie - odwracalne)

Uszkadzają one wiązania wodorowe białka i powodują utratę aktywności biologicznej, ALE STRUKTURA I RZĘDOWA JEST ZACHOWANA!

Po denaturacji białko się wytraca z roztworu.

4.w pH zasadowym dysocjują grupy karboksylowe aminokwasów białka i ma ono ładunek ujemny a w pH kwaśnym dysocjują grupy aminowe aminokwasów białka i białko ma ładunek dodatni. W pH fizjologicznym (7,4) dysocjują obie grupy, dlatego cząsteczka aminokwasu nie ma ładunku (jest elektrycznie obojętna).

5. fenyloalanylo-walinylo-glicylo-walina

6.chromatografia kolumnowa (podział ze względu na sposób wykonania rozdziału) jest stosowana m.in. do

-chromatografii adsorpcyjnej,

-podziałowej(różna rozpuszczalność [jej ocena pomocna w szacowaniu współczynnika podziału] rozdzielanych substancji w obu fazach; techniki: kolumnowa, cienkowarstwowa, bibułowa)

- i jonowymiennej.

Budowa:

- faza stacjonarna (złoże): ziarna zmodyfikowanej celulozy, akrylamidu, krzemionki pokryte chemicznymi grupami funkcyjnymi

-mieszanina białek nałożona na kolumnę

-fazą ruchomą przemywa się białka i zbiera eluat.

Złoże oddziałuje z białkami, bo mają one ładunek(chromatografia jonowymienna), są hydrofobowe(ch. Oddziaływań hydrofobowych), albo są zdolne do wiązania ligandów(chromatografia powinowactwa)..

7.pI jest to wartość pH obliczona ze średniej wartości pKa form po obu stronach formy izoelektrycznej; wypadkowy ładunek wynosi 0.

8.alanylo-histydylo-glutamina

9.chromatofrafia adsorpcyjna; rozdział powoduje różnica współczynników adsorpcji, niezaadsorbowane cząsteczki są wypłukiwane wcześniej. Związane białka po rozerwaniu kompleksu ze złożem przez gradient rosnącego stężenia soli są wymywane wybiórczo w zależności od powinowactwa do złoża.

10. fenyloalanina, tyrozyna, tryptofan, histydyna

11.Jeżeli chodzi o poznanie struktury pierwszorzędowej białka: zachodzi pod wpływem ataku gorącego kwasu solnego na peptyd, następnie grupy alfa aminowe wolnych aminokwasów reaguja z 6-aminochinolino-N-hydroksybursztynyloimidokarbaminianem i powstają fluorescencyjne pochodne które można rozdzielić i zidentyfikować za pomocą DHPLC. Rozkład peptydów na aminokwasy zachodzi też pod wpływem star\enia się peptydu - proces deaminacji, denaturacji, czy kowalencyjne przyłączenie cząsteczek ubikwityny i rozkład peptydu w proteasomie.

---