9 produkty metabolizmu

Ćwiczenie XI

Procesy życiowe drobnoustrojów – wykrywanie produktów metabolizmu

Szczepy bakteryjne:

1. Staphylococcus albus

2. Escherichia coli

3. Salmonella typhimurium

4. Proteus vulgaris

5. Enterobacter aerogenes

Ćwiczenia wykonujemy niejałowo

1. Wykrywanie acetoiny i kwasów organicznych

Odczyn Voges-Proskauera – do wykonania ćwiczenia wykorzystuje się 24 godz. hodowle w/w szczepów w płynnym podłożu Clarka. Do krótkich probówek pobrać po 1 ml hodowli
i dodać 0,6 ml 5% r-ru α naftolu w 96% etanolu, wymieszać i dodać 0,4 ml 40% KOH
z dodatkiem 0,3% kreatyny. Wstrząsnąć energicznie i wstawić do cieplarki (37°C) na
30-40 min.

Wstąpienie czerwonego zabarwienia (pierścienia) w górnej części płynu oznacza wynik dodatni. W przypadku wyniku ujemnego podłoże nie zmieni barwy lub daje zabarwienie pomarańczowe.

Odczyn polega na wykrywaniu w hodowli acetoiny, stanowiącej jeden z produktów rozkładu glukozy. Acetoina w środowisku alkalicznym (KOH), w obecności tlenu atmosferycznego i kreatyny, utlenia się do diacetylu, który w obecności α naftolu reaguje z guaniną pochodzącą z peptonu dając czerwone zabarwienie (wynik dodatni).

Odczyn z czerwienią metylową MR (Methyl Red) – próba pozwala na wykryć gromadzenia się w hodowli kwasów organicznych. Do 1 ml hodowli w podłożu Clarka dodaje się 1-2 krople wskaźnika (0,1 g czerwieni metylowej + 300 ml 96% etanolu). W wyniku rozkładu glukozy powstają kwasy organiczne, obniżając pH hodowli.

Zabarwienie czerwone oznacza wynik dodatni, zabarwienie żółte ujemny.

Podłoże Clarka

fosforan potasu dwuzasadowy 0,5 g

pepton 5,0 g

glukoza 5,0 g

woda do 1000 ml

2. Wykrywanie amoniaku (próba Nesslera)

Do krótkich probówek pobrać po 2 ml hodowli szczepów w bulionie LB dodać kilka kropli 50% r-ru winianu sodowo-potasowego oraz parę kropli odczynnika Nesslera. W obecności NH3 powstaje zabarwienie od jasnożółtego do brązowego.

Odczynnik Nesslera:

(A) NaOH 85 g

H2O 800 ml

(B) sól Nesslera (odczynnik jodowo-rtęciowy) 68 g

H2O 800 ml

3. Wykrywanie indolu

Posiej badane szczepy. Po kilku dniach inkubacji bakterii w bulionie tryptofanowym wykrywa się obecność indolu wg metody Kovácsa.

Hodowlę nawarstwić (wlać delikatnie po ściance probówki) 0,3-0,5 ml odczynnika Kovácsa.

Odczynnika Kovácsa (odczynnik ma kolor słomkowy):

p-dwumetyloaminobenzaldehyd 5 g

alkohol amylowy lub izoamylowy 75 ml

HCl stęż. 25 ml

W obecności indolu pojawia się po kilku sekundach czerwony pierścień na granicy płynów, a później cała objętość nawarstwionego odczynnika zabarwia się na czerwono.

Bulion tryptofanowy (pH 7,5):

pepton 10 g

NaOH 6 g

DL tryptofan 1 g

H2O 1000 ml

4. Wykrywanie fosfatazy

Po inkubacji bakterii w bulionie z dodatkiem odczynnika na fosfatazę (sól sodowa kwasu fenoloftaleinofosforowego) dodaje się 1-2 krople 10% r-ru NaOH. W przypadku wytwarzania fosfatazy podłoże zabarwia się na kolor amarantowy wskutek obecności fenoloftaleiny odszczepionej przez fosfatazę od kwasu fenoloftaleino fosforowego.


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Produkty metabolizmu centralnego
Produkty metabolizmu centralnego
Metaboliczny szlak produkcji psilocybiny
Produkty przeciwwskazane w chorobach jelit II
Ewolucja marketingu era produkcyjna, sprzedazowa, marketingowa Rynek definicja
download Zarządzanie Produkcja Archiwum w 09 pomiar pracy [ www potrzebujegotowki pl ]
Przygotowanie PRODUKCJI 2009 w1
PodMar 5a (istota produktow)
Wyklad 2 zarzadzanie produkcja
strategie produktu
Referat Inżynieria Produkcji Rolniczej
Produkt turystyczny 2
zarzdzanie produkcja i uslygami
zarządanie produkcją 5
zarządanie produkcją 2

więcej podobnych podstron