Konspekt

Małgorzata Nemeczek, Natalia Łowkis gr. 1/5

Temat: Zależność szybkości reakcji od stężenia enzymu na przykładzie katalazy.

Wykonanie:

- przygotowałyśmy 5 oznakowanych probówek na roztwory enzymu (katalazy) o różnym rozcieńczeniu

- do pierwszej probówki dałyśmy 3ml hemolizatu, czyli nierozcieńczonego roztworu enzymu

- do kolejnych probówek dałyśmy roztwory hemolizatu i wody destylowanej o rozcieńczeniu 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, tak by objętość w każdej probówce wyniosła 3ml

- następnie przygotowałyśmy próbkę zerową: odpipetowałyśmy 0,5ml hemolizatu, 2ml 1 mol/l H₂SO₄ oraz 2ml 0,02% roztworu H₂O₂ (substratu)

- przygotowałyśmy 20 oznakowanych probówek z roztworem do zahamowania reakcji (2ml 1 mol/l H₂SO₄)

- przed rozpoczęciem inkubacji roztworów substratu i enzymu doprowadziłyśmy do temperatury pokojowej

- przygotowałyśmy 5 oznakowanych kolbek na mieszaninę inkubacyjną. W tym celu odmierzyłyśmy do każdej z kolbek 10ml 0,02% H₂O₂ oraz 2,5ml enzymu o odpowiednim rozcieńczeniu.

- próbki kontrolne przygotowałyśmy tak jak próbki badane bez inhibitora

- do prób kontrolnych, bezpośrednio po przygotowaniu, dodałyśmy po 5ml 0,02M NaOH w celu zahamowania reakcji.

Nr próbki	Czas, po którym mierzyłyśmy próbki
		2 min	4min	6 min	10 min
1	1,0 ml	0,3 ml	0,3 ml	0,1 ml
2	2,0 ml	1,2 ml	0,9 ml	0,4 ml
3	2,0 ml	1,4 ml	1,1 ml	0,6 ml
4	2,0 ml	1,6 ml	1,4 ml	0,9 ml
5	2,3 ml	1,8 ml	1,6 ml	1,0 ml

Ilość mmoli H₂O₂ w próbce zerowej 2ml 0,02% H₂O₂

2 H2O2 są w 100ml r-ru
x g H2O2 - 2 ml r-r

x = (2x2)/100 = 0,04g H2O2
34g H2O2 - 1000mmoli
x= (0,04x1000)/ 34 Ilość mmol = 1,18mmola H2O2

[S]= 1,18

Vmax = 7

Km=0,55

V= 4,77

Wnioski:

Jest to inhibicja kompetycyjna, ponieważ wartość Km wyznaczona w obecności inhibitora

jest wyższa w porównaniu z rzeczywistą Km (bez inhibitora).

---