Liczenie bezpośrednie breeda-na odtłuszczonym szkiełku podst.wyznaczyć kwadrat o pow.1cm2,nanieść kalibrowaną ezą 0,01cm3 zawiesiny bakterii,rozmaz,utrwalić,zabarwić,policzyć pod immersją kom.w3preparatach przygotowanych z tej samej zawiesiny,policzyć średnią z 20pól widzenia,Pol.śr.arytmetyczną liczby kom i przeliczyć na ilość kom.w zawiesinie badanej(wzór).Thoma -na szkiełko nanieść kroplę zawiesiny drobnoustrojów(drożdży),przykryć szkiełkiem nakrywkowym,znaleźć siatkę komory w obiektywie 10x,40x.liczyć liczbę kom.w np80małych kwadracikach,z sumy kom.liczyć sredniąx4000x1000-wynik na 1cm3.jeśli w zawiesinie jest dużo kom.trzeba wykonać rozcieńczenie i wzgl. przy obliczaniu rzeczyw.liczby kom.Komora Burkera-tak samo, wyznaczyć średnią liczbę kom.w1kwadracie i przeliczyć wg wzoru.zalety metod bezpośr:szybka możliwośc otrzymania wyniku,liczenie kom.żywych i martwych.metoda płytkowa-nie liczymy kom.drobnoustrojów ale kolonie po hodowli na odpowiednim podłożu mikrobiologicznym.podłoże odżywcze-ogólna liczba drobn,podłoże selektywne-określony typ dr,odpow.warunki inkubacji-wpływ na wzrost danej gr.mikroorg.metoda prosta do liczenia i izolowania czystych kultur i obserwacji morfologicznych kolonii,metoda:wysiew odpowiednio rozcieńczonej zawiesiny kom.dr.na podłoże stałe,inkubacja,liczenie wyrosłych kolonii,założenie-z każdej kom.wyrasta1kolonia,wykonanie:sporządzić rozcieńczenia 10krotne badanej zawiesiny kom w NaCl.Wykonanie posiewów,wysiać jałowo na płytki petriega po 1cm3 zawiesiny.Zalać płytki odp.podłożem agarowym i wymieszać z posianą zawiesiną drobn.Po zastygnięciu agaru odwrócić płytki do góry dnem,inkubować w odp.temp,odp.czas.Policzyć kolonie wyrosłe na płytkach,na których ich liczba:10-300,2lub3 powtórzenia,średnia arytm.liczby kolonii,wynik odnieść do 1cm3/1gbadanej próby wg wzoru,wynik podać jako liczbę zawartą 1,0-9,9 pomnożoną10dox.Zalety met.płytkowej:do różnych drob,też bakterii,oznaczamy tylko liczbę kom.żywych,obserwacje jakościowe ozn.mikroflory.Wady:niedokładna,nie zawsze 1kolonia=1kom(skupiska bakterii),niemożliwe dostosowanie warunków inkubacji i podłoża do wymagań wszystkich dr,długotrwała,materiało i pracochłonna.Kolonia-zespół bakterii powst.po podziale kom,odizolowana od innych kolonii stanowi czystą kulturę,widoczne gołym okiem lub przez lupę jako skupienia o charakterystycznym wyglądzie który zmienia się w zal.od rodzaju podłoża,czasu,temp inkubacji.Cechy:wzrost:powierzchniowy,podpow,wgłębny.Wielkość:mała średnicado1mm,średnia1-3mm,duża>3mm.Kształt:okrągły,rizoidalny,nieregularny,strzępiasty.Profil:płaski,lekko wypukły,silnie wypukły,pępkowaty,kraterowaty.Brzeg kolonii:regularny,niereg,rozlany,strzępiasty,falisty Przejrzystkość:przejrzysta,matowa,półprzejrz,opalizująca.Fluorescencja:obecna/brak.Barwa:obecność pigmentu/brak,intensywność zabarwienia,zabarw.otoczki.Struktura:rozmazanie ezą:ziarnista,krucha i pylista,włóknista,skórzasta,mazisto-kremowa.Zapach-obecny/brak,intensywność.Drożdże-grzyby 1komórk,rozmnażają się przez pączkowanie/podział.Ascomycetes-tworzą zarodniki workowe,Basidiomycetes-z.podstawkowe,Deuteromycetes-nie wytw.zarodników płciowych.niektore barwniki wytwarzane przez drożdże są typu melaniny lub mają charakter karotenoidów.drożdże pozbawione chlorofilu-saprofity,niektóre pasożyty.do rozwoju potrzebują tlenu,źródła organicznego węgla,azotu mineralnego/org,składników mineralnych,witamin. dr.metabolizują substraty węglowodanowe na drodze oxydacyjnej lub przez fazę tlenową na początku namnazania,konczac na fermentacji beztlenowej prowadzacej do wytworzenia etanolu i co2.do rozwoju podloze o ph=4,5-6,5,temp5-37,optimum25,w wysokiej giną,są osmotolerancyjne i wytrzymuja aktywność wodna środowiska =0,7Budowa kom-zal.od gatunki,warunkow,wieku hodowli,stanu odżywienia,okrągly,woalny,elipsoidalny,cylindryczny,jak cytryna,1-10mikrometrow szerokości,2-10/20-50dł.ściana kom-sztywna,utrzymanie kształtu kom,składa się z3warstw:zewnętrznej z białka,srodkowej z glukanu,wewnętrznej cienkiej blony bialkowej,nie wyst.zadne organelle ruchu,kom.nieruchliwe,w kom.mlodych s.k jest cienka,błona cytoplazmatyczna,retikulum endoplazma tyczne,cytoplazma-w młodych jednolita,wypelnia cala kom,starsze maja ziarnistości,wodniczki wypelnione sokiem kom,jądro otoczone membraną z jąderkiem-owalne,srednica2,5mikrometra,w nim mat.gen w postaci chromosomow,widoczne pod mikros.po wykonaniu specjalnego barwienia bo współ.zal.sw.podobny do cytoplazmy,mitochondria,wodniczki,subst.zapasowe-odkladane w cytoplazmie dojrzalych kom w postaci:wolutyny-komplex:polifosforany-białko-lipidy,gromadzi się w cytopl.i wodniczkach w postaci ziarnistości,tworzy się gdy podloze bogate w związki azotowe,widoczne bez barwienia lub po blekit metylenowy, glikogenu-polisacharyd,w kom.drozdzy hodowanych na podlozach bogatych w cukry,ubogich w azot,widoczny po zab.r-rem lugola(b.ciemnobrazowa),tluszczu-tworzone gdy w podlozu ograniczona il.azotu,stanowia do50%suchej masy komórki.wyst.w postaci kropel,barwi się je Sudanem III na czerwono, trehalozy-dwucukier gromadzony przez kom.dr.piekarniczych 16%s.m.kRozmnażanie-wegetatywne:pączkowanie-w początkowym etapie tworza się uwypuklenia i podzial jadra.1cz idzie do uwypuklenia,pączek powieksza się,oddziela blona i staje nowym org.kom mogą się oddzielac od siebie lub nie-pseudogrzybnia.paczkowanie1biegunowe,2bieg,wieloboczne,szybkość pacz.zal.od składu pożywki,temp,dostępu pow.zachodzi gdy korzystne warunki rozwoju.podział poprzeczny-dojrzala kom rosnie,wydluza się,przeweza w1kierunku,wytworzenie przegrody poprzecznej miedzy k.nowa a macierzysta.wytwarzanie zarodnikow wegetat-niesprzyjajace warunki otoczenia(przejscie z bogatego podloza na ubogie),wokół dzielącego sie jadra powst.skupienia cytoplazmy,rozdzielaja się i otaczaja wlasnymi blonami tworząc odp.kształtu zarodniki: kulisty, owalny ,kapeluszowaty,liczba powst.zar4-8 Zarodnikowanie płciowe i kopulacja-tworzenie zar.poprzedza pr.kopulacji-kom.lacza się wyrostkami kop,jadra zlewaja się-powst.zygota diploidalna i dziela kilkakrotnie,kazda cz.otacza się cytoplazma i blona.miedzy kom tej samej/innej wielkości-pr.heterogamiczny,kom meska(mniejsza)przelewa się do zenskiej.utworzone zarodniki sa zamkniete wewnątrz kom.w owalnym woreczku-drozdze zarodnikujące zaliczane do workowcow

Pleśnie-tlenowce-wyst.napowierzchni substratów,wilgotność sr.wplywa na rozwoj grzybni,zarodnikowanie,kielkowanie zarodnikow,grzyby wymagaja wysokiej aktywności wodnej,plesnie w suszonych owocach,suchych wedlinach-kserofilne-a.w<0,75.temperatura rola w rozwoju grzybni,wytwarzaniu,kielkowaniu zarodnikow7-40,optimum 20-25.plesnie w chłodniach-6.gatunki termofilne w wys.w tunelach do suszenia makaronow spozywczych57.konidia/zarodniki mogą przezyc b.wysoka t,a szok termiczny może pow.kielkowanie-w piecach piekarniczych.ph4-8Budowa grzybni-organizm g.strzepkowych-grzybnia ze strzepek,wielokrotnie rozgałęzionych,rozrastających się na pow.i czesciowo wrastających w podloze.strzepki mogą nie mieć przegrod poprzecznych-g.nizsze,lecz ich kom.zaw.wiele jader-grzybnia1kom-cenocetyczna.u innych plesni strzepki podzielone przegrodami-septami,tworząc g.wielokom.kom.zaw.wszystkie organelle char.dlaEucaryota,inny sklad chem.scianykom-(chityna),celuloza,glukanRozmnazanie-bezplciowo przez fermentacje grzybni,tworzenie spor,artrospor-komorek oderwanych od strzepki,pełniącymi f.zarodnikow.plciowe-u sprzężniaków,workowcow-laczenie strzepek różnoimiennych oznaczonych+i-albo gametangiow wykształcających się na koncach strzepek różnoimiennych lub gamet powst.w gametangiach.U sprzezniakow po zlaniu się Gametangiow na koncach strzepek +i-powst.diploidalna zygota,otacza się gruba kilkuwarstwowa sciana,tworzy zygospore.przed kielkowaniem zygospory dochodzi do podzialu redukcyjnego jadra kom(mejozy)-powst.nowe strzepki sa haploidalne.tylko zygota jest dipl,strzepki i zarodniki bezpłciowe-haplo.U workowcow-po polaczeniu2strzepek i przemieszaniu ich cytoplazmy,2jadra zbliżają się do siebie ale nie lacza(faza dikariotyczna).strzepki zaw.kom.dikariotyczne formuja char.owocniki,wktorych rozw.sie worki z zarodnikami.w kom.przeksztalconej w worek zlewaja się 2jadra i powst.diploidalna zygota.przechodzi podzial mejotyczny,daje4haplo jadra,które dziela się mitotycznie-powst.8haplo jader.otaczaja się one cytoplazma,każdy tworzy askosporę-zarodnik workowy.po rozerwaniu worka zarodniki sa uwalniane i daja poczatek haploidalnej grzybni.Identyfikacja-obserwacja cech morfolog w roznych stadiach rozwoju grzybni.grzybnia-podzielona septami/1kom.Sporangiofory i zarodnie-ulozenie,wielkość,brak/obecność apofizy.Konidiofory-ksztalt,rozgałęzienia,ulozenie.Zarodniki wewnętrzne/zewnętrzne(konidia)-ksztalt,wielkość,powstawanie,barwa.po tyg.hodowli na podlozu agarowym:wyglad,zabarwienie grzybni.kształt,wielkość kolonii.obecnosc stref koncentrycznych.struktura powierzchni kolonii.brzeg kolonii.szybkosc namnazania.zmiana zabarwienia podloza.zapach.Pozywka mikrobiologiczna-srodowisko w którym sztucznie wytworzono warunki namnazania drobnoustrojow dzieki odpowiednio dobranym składnikom odżywczym.dla drobnoustr.autotroficznych pożywki zaw.tylko związki mineralne,których utlenianie dostarcza im energii potrzebnej do asymilacji CO2.dla heterotrofow-sr.wktorych Cwyst.jako latwo przyswajalne źródło-cukry,zrodla azotu-organiczne,mineralne.pozywki te do hod.bakterii,grzybow,niekt.pierwotniakow i glonow,nie dla wirusow-w żywym org/hodowli tkankowej.Cechy-odpowiednia wartość odzywcza-zapewnia optymalny wzrost,namnazanie drobnoustr.zawiera źródłoC i energii,Norg/nieorg,tlenu,H,S,F.b.wymagajace-witaminy,aminokwasy,K,Na,Mg Optymalny odczyn ph-bakterie6,8-7,4,grzyby5-6.ustawienie odczyny r-ramiNaOH,HCl,kw.cytrynowego Odpowiednie CisnOsmo tyczne-do uzyskania Pizotonicznego w stos.do wnętrza kom.stosuje się NaCl.W podlozu hipertonicznym(wyzszePosmotyczne niż w kom)kurczenie się plazmy kom.na skutek wydzielania wody do środowiska w celu wyrównania cisnien,pozniej oddzielenie plazmy od sciany kom,powoduje to zaburzenia normalnych f.zyciowych.W hipertonicznym-woda wnika do kom.pecznieja i pekajaPrzejrzystosc-mozliwosc obserw.wzrostu mikroorganizmowSterylnosc-niezbedna w hodowli czystych kultur drobnoustr,przeprowadza się w autoklawachPodzial ze wzgl.na sklad chem.podlozy-naturalne-zaw.mleko,surowice krwi,marchew,wyciagi z tkanek roślinnych i zwierzęcych-zapewn.dobry wzrost drobn.Syntetyczne-każdy składnik określony ilościowo i jakościowo.do badan diagnostycznychPolsyntetyczne-zaw.skladniki naturalne i określone ilościowo i jakościowo zw.chem.na podst.wl.fiz:płynne-klarowne,składniki dokladnie rozpuszczone-bulion,brzeczka,mleko odtłuszcz,serwatkaPodloza stale-zestalone dodatkiem subst.zelujacej,gladka,elastyczna powierzchnia,przejrzystość,drobnoustr.rozwijaja się w postaci kolonii,do ich zestalania stosujemy agar/zelatyneAgar-polisacharyd zaw galaktoze,otrzymywany z glonow morskich,ma wł.zelujace,latwo ulega odwodnieniu,uplynnia się w temp.bliskiej100,zestala45-48 w twarda,przejrzysta galaretke.nie jest skl.odzywczym.pozywka zestalone agarem powinna miec ph=51,5-3%dodajemyZelatyna-charakter bialkowy,otrzymywana z odpadow zwierzęcych bogatych w kolagen,uplynnia się 25-27,hydrolizowana przez liczne bakterie o wl.proteolitycznych ilość tego skl.dod.do podlozy12-15%Podloze półpłynne-zaw.czynniki zelujace w zmniejszonej ilości.wg zastosowania:podstawowe-drobn o przeciętnych wymaganiach odżywczych-bulion,agar zwykly dla bakterii,wyciag slodowy dla grzybowWzbogacone-dr.o wysokich wymaganiach odż(bak.chorobotworcze)dodanie krwi,witamin,aminokw,surowicy.wybiorcze-do wyosobnienia określonego gatunku bakterii.do podl.podst.dodajemy inhibitory hamujące wzrost niepozadanych mikroorg,a nie wywierające szkodlwego wpływu na drobnoustr,które hodujemy.-Roznicujace do odróżnienia poszczególnych gatunkow bakterii na podst.ich wł.biochemicznych.tj.zdolnosci do rozkladania jakiegos substratu dodanego do podloza podst.Namnazajace-podl.podst uzupel nione czynnikami przyspieszajacymi i ułatwiającymi wzrost bakterii które chcemy wyosobnic i czynnikami hamującymi to zwoj mikroflory towarzyszącej.PrzygotowaniePozywki:odważyć skl.podloza,sporządzić r-r w ½ koncowej V H2O,wymieszac,podgrzac jeśli zle się rozp,oznaczyc ph-jeśli odczyn do korekty-dodac kwasu/zasady.r-r uzupełnić woda do koncowej V.jesli robimy podl.stale to dodajemy agaru-nie zmienia ph.rozlac podloze do probowek,sterylizowac w autoklawie/pasteryzowac w ap.kocha-subst.wrazliwe na wysoka temp i cisnienie.Antybiogram-opis wrażliwości danego gatunku drobnoustr.na dzialanie określonego antybiotyku.niezbedny podczas doboru antyb.w leczeniu chorych

---