TERAPIA GENOWA, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin


TERAPIA GENOWA

- leczenie przyczyn, a nie objawów

- wprowadzanie genu terapeutycznego lub oligonukloetydu

gen terapeutyczny ---> wirusowy DNA ---> w kompleksie lub nagi DNA

---> plazmidowy DNA ---> zrekombinowany DNA

0x08 graphic

TRANSFER

komórka docelowa

0x08 graphic

EKSPRESJA

efekt fenotypowy

Rodzaje terapii:

- germinalna: eliminacja defektu genetycznego w komórkach rozrodczych lub we wczesnym okresie zarodkowym (zakazana ze wzgl. moralnych)

- somatyczna: pierwotny efekt nie jest usuwany, lecz ma charakter zachowawczy

Za pomocą terapii można:

- uzyskać przywrócenie lub wzmocnienie utraconej w pełni lub częściowo funkcji zmutowanego genu

- uzyskać supresję działania takiego genu, którego produkt zmieniony w wyniku mutacji jest odpowiedzialny za wystąpienie choroby

Przywrócenie utraconej funkcji genu polega na uzyskaniu ekspresji wprowadzanego „funkcjonalnego” genu w ściśle określonej tkance.

Gen funkcjonalny = gen pozbawiony intronów (same eksony), jest to cDNA

Efekt celowania można osiągnąć:

- zaopatrująć wprowadzany gen w odpowiedni system regulacji

- wprowadzając prawidłowy gen bezpośr. do tkanki, w której ma ulec ekspresji

Wprowadzanie genu

Gen musi się utrzymać w komórce jak najdłużej (bo czas ekspresji zależy od długości życia komórki), przy czym stopień ekspresji zależy od ilości produkowanewgo białka (kodowanego przez ten gen funkcjonalny)

Terapeutyczny gen, uzyskiwany efekt:

>> kompensacja defektu genetycznego

>> eliminacja „złych” komórek

>> nowe cechy fenotypowe

>> hamowanie ekspresji zmutowanego genu

Terapię genową zastosowano po raz pierwszy 14.09.1990 o 8:59, była to kompensacja niedoboru ADA

Kompensacja defektu genetycznego

- metodę stosuje się najczęściej w mutacjach recesywnych

- nie usuwa się defektu, lecz kompensuje jego skutki biologiczne

- np. geny kodujące globiny, czynniki krzepnięcia, deaminazę adenozynową

Ograniczenia:

1. wielkość genu (do kilka tys. par zasad)

2. wydajność transferu genu do komórek docelowych- konieczne jest zainfekowanie jak największej ilości komórek

3. przypadkowa losowa integracja transgenu z genomem komórki- mutacje insercyjne

4. czas utrzymywania się transgenu w kom.docelowych

5. wektory- najlepiej wysokowydajne, łatwe w stosowaniu i bezpieczne

ETAPY STRATEGII:

1. przygotowanie geny (wycięcie intronów)

2. przygotowanie wektora

3. wybór i przygotowanie kom.docelowych

Sposoby wprowadzania transgenu:

1. in vivo

np. domięśniowo, doguzowo, dożylnie, czyli bezpośr. do organizmu

wykorzystuje się tu swoistość transdukcyjną, tj.:

- naturalny tropizm wirusów do konkretnych tkanek (np. neurotropizm wirusa opryszczki)

- za pomocą nośników z odpowiednimi ligandami, które rozpoznają swoiste receptory (np. ligand asjaloorozomukoidu --> hepatocyty)

2. ex vivo

- pobranie komórek od pacjenta

- hodowla i modyfikacja genetyczna

- wprowadzenie z powrotem do organizmu pacjenta

ważne jest, żeby transgeny wprowadzać do określonych komórek, z pominięciem komórek rozrodczych

Wybór komórek docelowych zależy od typu schorzenia (np. nabłonek oddechowy w mukowiscydozie). Nie zawsze trzeba wprowadzać transgen do „chorej” tkanki (np. w hemofilii transgen jest wprowadzany do mięśni. Mięśnie zaczynają produkować czynnik krzepnięcia i uwalniają go do krwioobiegu).

Hamowanie ekspresji zmutowanego genu

- w mutacjach dominujących

- ekspresję genu hamuje się na poziomie transkrypcji lub translacji, za pomocą antysensów

ANTYSENSY = oligonukleotydy (20-30 par zasad, deoksyrybo- lub rybonukleotydy), których sekwencja jest komplementarna do mRNA lub do sekwencji DNA genomu lub jego promotora.

Antysensy hybrydyzując z:

- mRNA tworzą duplexy; duplex uniemożliwia połączenie się mRNA z rybosomem

- promotorem uniemożliwiają replikację

- DNA tworzą triplexy; do triplexów nie mogą przyłączyć się czynniki transkrypcji, uniemożliwiając transkrypcję

Skuteczność terapii antysensami zależy od:

>> stabilności antysensów

>> ich ilości w komórce

>> metod wprowadzenia antysensów do komórki

Korekta zmutowanego genu

- zarówno choroby dominujące, jak i recesywne

- korekta jest trwałą, a wielkość genu nie ma znaczenia

Do naprawy wykorzystuje się oligonukleotydy, rybozymy i oligonukleotydy chimeryczne (tj. zbudowane z deoksyrybo- i rybonukleotydów na raz).

Udział w procesie biorą:

- enzymy naprawiające błędne sparowania

- enzymy wycinające nukleotydy

- enzymy biorące udział w homologicznej rekombinacji

Ograniczenia:

- brak precyzji

- powstawanie dodatkowych mutacji

- niska wydajność procesu

Eliminacja „złych” komórek

- zastosowanie w nowotworach i HIV

Zabijanie komórek nowotworowych:

1. bezpośr.: gen kodujący toxyczne białko jest wprowadzany do komórki nowotworowej i ulega ekspresji (tylko tam!), zabijając komórkę

>> geny samobójcze: kodują białka, które przekształcają podawany i.v. prolek do tox. metabolitów, zabijających komórkę

>> geny proapoptyczne: indukują apoptozę

2. pośr.: uaktywanienie komórek immunologicznych do swoistego zabijania komórek nowotworowych

Modyfikacja genetyczna komórek -> nadawanie nowych cech fenotypowych

>> geny kodujące białka aktywujące komórki ukł.immuno. (geny immunomodulacyjne)

>> geny kodujące czynniki proangiogenne (do terapeutycznej angiogenezy w chorobach niedokrwiennych)

>> geny kodujące czynniki antyangiogenne (np. angiostatyna, do terapii nowotworów)

>> geny wielolekowej oporności MDR (transfer do szpiku pozwala osłonić komórki prawidłowe przed działaniem cytostatyków, stosowanych w nowotworach)

>> szczepionki DNA (wprowadza się in vivo wektora kodującego antygen i wywołuje oporność)

>> szczepionki RNA (wprowadza się samoreplikujące się wirusy RNA, które zawierają geny kodujące antygeny )

PODSUMOWANIE STRATEGII

Nowotwory:

- zmiana „złośliwego” fenotypu

- protekcja komórek prawidłowych

- eliminacja komórek nowotworowych

- hamowanie ekspresji zmutowanych genów

Choroby monogenowe AD:

- hamowanie ekspresji zmutowanych genów

Choroby monogenowe AR:

- kompensacja defektu

- korekcja mutacji

HIV:

- eliminacja zainfekowanych komórek

- hamowanie ekspresji genów wirusowych

SŁOWNICZEK ;p

Wektor = nośnik, do którego można wstawić DNA

Wektor ekspresyjny = wektor umożliwiający wydajną transkrypcję wbudowanego do niego transgenu

Wektory niewirusowe = kompleksy (liposomy kationowe lub związki polikationowe + palzmidowy DNA)

Transdukcja = do transferu użyto wektora wirusowego

Transfekcja = do transferu użyto wektora niewirusowego

Najczęściej używane wirusy:

- adenowirusy

- etrowirusy

- entiwirusy

- herpes

- AAV (wirusy towarzyszące adenowirusom)



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
zespol Wolfa-Hirschorna, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
hemochromatoza, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
GENETYKA KLINICZNA V - seminarium Genetyka zaburzen roznicow, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
mezczyzni 47, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
Miopatie mitochondrialne, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
zespol Noonan, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
GENETYKA wykład 1, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
badanie kariotypu- badanie cytogenetyczne, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
zespol Li Fraumeni, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
Mikroabberacje, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
zespol Marfana, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
zespol Downa, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
genaetyka tematy, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
gielda z genetyki, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
zespol Edwardsa, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
zespol lamliwego chromosomu X, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
Zespół Klinefeltera, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin
przyczyny niskoroslosci, VI rok, Genetyka, Genetyka, Egzamin

więcej podobnych podstron