006

Z mieszaniny inkubacyjnej pobierać 2x po 1,0 ml roztworu w czasie:

3, 5, 10,    15,    20, 30, 45 i 60 min od momentu dodania enzymu

i pobrane próbki dodać do przygotowanego roztworu 2M HC1.

Obserwować jak zmienia się barwa mieszaniny inkubacyinei w czasie !

Po zakończeniu doświadczenia, do próbek dodać kolejno :

1000 ul mieszaniny molibdenian - azotan(III)sodu (odcz. „10 ")

1000 ul 2M NaOII

Po 10 minutach dokonać pomiaru spektrofotometrycznego przy a. = 460 nm względem próby ślepej. Wykonać wykres zależności A460 od czasu inkubacji.

*) - ustalić doświadczalnie optymalną ilość dodawanego enzymu, zależną od aktywności otrzymanego preparatu

3.    Opracowanie wyników

Wyniki pomiarów dla standardowych roztw^rorów^r L-DOPA zestawić w tabeli i wykonać wykres kalibracyjny , wyznaczyć współczynnik kalibracyjny k Wykonać wykres ilustrujący przyrost ilości L-DOPA, produktu reakcji tyrozynazy w czasie inkubacji. Przedstawić wnioski

4.    Literatura

1.    Seo S-Y..Sharma V.K., Sharma,N., - Mushroom tyrosinase : recent prospects

J.Agricult.Food Chem., 5L (2003), 2837-2853

2.    Arnow I.E., - Colorimetric determination of the components of 3,4-dihydroxy-

-phenylalaninc - tyrosine mixturcs, J.Biol.Chem.,18, (1939),531 -537

3.    Munjal N., Sawhney, S.K., - Stability and properties of mushroom tyrosinase

entrapped in alginate, polyactylamide and gelatin gels Enzyme Microbial Technol., 30. (2002), 613-619

4.    Uaghbcen K., Jazii F.R., Karkhane A.A.,Borojcrdi S.S., - PuriFication of tyrosinase

from edible mushroom. Iranian J.Biotechnol., 2, (2004), 189-194

5.    Yahsi A., Sabin F., Dcmirel G.,Tumturk H., - Binary immobilization of tyrosinase

by using alginate gel beads and poly(acrylamide-co-acrylic acid) hydrogels, Intcm.J.Biol.Macromolecules 36, (2005), 253 - 258

6.    Ates S., Cortenlioglu E., Bayraktar E., Mehmetoglu U., - Production of L-DOPA

using Cu-alginate gel immobilized tyrosinase in a batch and packed bed reactor, Enzyme Microbial Technol., 40, (2007). 683 - 687

7.    Aytar B.C., Bakir O., - Preparation of cross-linked tyTosinase aggregates

Proccss Biochem., 43* (2008), 2125 - 131

6