DSCF6755

118

-    ostrożnie wlać resztę fazy ruchomej do komory chromatograficznej,

-    przykryć komorę płytką szklaną zaginając na zewnątrz końce

bibuły,

-    pozostawić na godzinę w celu nasycenia komory (jest to czas na przygotowanie roztworów).

2. Przygotowanie roztworów wzorcowych

ROZTWÓR WZORCOWY 1 - roztwór tioguaniny o stężeniu 4 mg/ml: odważyć 0.040 g tioguaniny i rozpuścić w 3 ml roztworu wodorotlenku sodu o stężeniu c(NaOH) = 0.1 mol/l, przenieść do kolby miarowej pojemności 10 ml i uzupełnić wodą do kreski,

ROZTWÓR WZORCOWY 2 - roztwór tioguaniny o stężeniu 0.08 mg/ml: pobrać 200 pl roztworu wzorcowego 1 i przenieść go do kolbki miarowej pojemności 10 ml, a następnie uzupełnić wodą do kreski.

ROZTWÓR WZORCOWY 3 - roztwór tioguaniny o stężeniu 0.02 mg/ml: pobrać 50 pl roztworu wzorcowego 1 i przenieść go do kolby miarowej pojemności 10 ml, a następnie uzupełnić wodą do kreski.

ROZTWÓR WZORCOWY 4 - roztwór guaniny o stężeniu 0.02 mg/ml: odważyć 0.040 g guaniny i rozpuścić w 3 ml roztworu wodorotlenku sodu o stężeniu c(NaOH) = 0.1 mol/l, przenieść do kolby miarowej pojemności 10 ml i uzupełnić wodą do kreski. Pobrać 200 ul tego roztworu i przenieść go do kolbki miarowej pojemności 10 ml, a następnie uzupełnić wodą do kreski.

3.    Przygotowanie roztworu badanego - LANVIS, średnia masa tabletki 0.22883 g. Odważyć ilość sproszkowanych tabletek odpowiadającą masie jednej tabletki. Ilość tę należy wsypać do kolby miarowej pojemności 10 ml, dodać 3 ml roztworu wodorotlenku sodu o stężeniu c(NaOH) = 0.1 mol/l, i wytrząsać przez około 20 min. Dopełnić wodą do kreski. Roztwór przesączyć i analizować przesącz.

4.    Przygotowanie dwóch płytek chromatograficzych:

-    zaznaczyć cienko ołówkiem linię startu na wysokości 1 cm od dołu płytki,

-od linii startu odmierzyć piętnastocentymetrową drogę

migracji,

-    zaznaczyć punkty, na które będzie się nanosić roztwory,

-    na linię startu, susząc płytkę suszarką, nanieść mikropipetą po 0.1 pl roztworów wzorcowych i roztwór badany tak, aby plamki nie nachodziły na siebie,

-    zwrócić szczególną uwagę na to, aby nie uszkodzić warstwy adsorpcyjnej,

-    płytki wysuszyć suszarką i umieścić w komorze chromatograficznej w celu rozwinięcia chromatogramu,

-    obserwować czoło rozpuszczalnika; kiedy pokona ono drogę 15 cm wyjąć płytkę z komory i wysuszyć w strumieniu ciepłego powietrza.

5.    Chromatogram oglądać pod lampą UV 254 nm. Widoczne plamy, linię startu i linię końcową zakreślić ołówkiem. Wykonać kserokopię płytki.

6.    Drugą płytkę spryskać roztworem azydku sodu i skrobi, a następnie włożyć do komory jodowej na 5 s. Widoczne plamy, linię startu i linię końcową zakreślić ołówkiem. Wysuszyć w strumieniu ciepłego powietrza. Wykonać kserokopię płytki.

7.    Opracowanie wyników.

-    wyznaczyć wartość współczynników Rf

R, = A/B

Ri-określa stosunek drogi migracji substancji chromatografowanych (od punktu startu do środka plamki - A) do drogi przebytej przez fazę ruchomą (od lini startu do czoła fazy ruchomej - B), gdzie B w tym przypadku wynosi 15 cm.

-    zinterpretować otrzymane wyniki. Sprawdzić zawartość substancji indukujących i nieindukujących reakcję jodo-azydkową. Uzasadnić czy lek nadaje się do handlu.