3582316498

METODY IZOLACJI KOMÓREK

0 metody izolacji komórek pozwalają otrzymać komórki inmmnologicznie czynne z płynów ustrojowych i tkanek litych do szeroko prowadzonych badań w warunkach fn vitro przy użyciu technik immunologii komórkowej; techniki te pozwalają scharakteryzować poszczególne populacje komórek oraz określić ich stan czynnościowy

0 źródłem komórek może być wiele narządów i tkanek, ale najczęściej uzyskuje się je z krwi obwodowej oraz z litych skupisk komórek limfoidalnych, jak węzły chłonne czy migdałki — do badań najczęściej izoluje się limfocyty T, limfocyty B, monocyty, granulocyty i komórki NK

0 wstępny etap otrzymywania zawiesiny komórkowej z płynów ustrojowych, np. z krwi obwodowej polega na pobraniu krwi obwodowej na heparynę, cytrynian sodu lub EDTA (wersenian sodu) w celu zapobieżenia krzepnięciu, a następnie poddaniu procesowi sedymentacji erytrocytów; uzyskany nadsącz zawiera limfocyty, monocyty i granulocyty (czasem niewielką domieszkę erytrocytów)

0 wstępny etap izolacji komórek immunologicznie czynnych z tkanek litych polega na uwolnieniu tychże komórek ze zrębu łącznotkankowego; w tym celu tkankę rozdrabnia się mechanicznie na małe fragmenty, a następnie skrawki tkanki trawi się za pomocą enzymów (w zależności od rodzaju tkanki stosuje się różne enzymy - kołagenazę, pronazę, DNA-zę - w różnych stężeniach); po trawieniu zawiesinę komórek oddziela się od fragmentów tkanki przesiewając przez odpowiednie sita łub filtry

0 izolację wstępną prowadzi się w starannie dobranych warunkach:

•S skład jonowy środowiska S pH środowiska

■S obecność substancji stabilizujących błonę komórkową S temperatura S czas trwania izolacji

0 po etapie wstępnym izolacji należy ocenić otrzymaną zawiesinę komórkową: