102066

Oznaczanie aktywności dehydrogenazy mleczanowej

Do klasy oksyreduktaz należą enzymy katalizujące reakcje utleniania i redukcji.

Dehydrogenaza mleczanów a LDH katalizuje odwracalną reakcję redukcji pirogronianu do mleczanu, podczas której NADH utlenia się do NAD+:

CHi-CHO-COO' + NADH + H* CHj-CHOH-COCT + NAD+

Proces można śledzić spektrofotometrycznie, bo forma zredukowana NADH posiada dodatkowe pasmo absorpcji przy 340 im

Stąd szybkość reakcji tworzenia NAD+ i mleczanu śledzi się mierząc zanik pasma absorpcji przy 340 nm metodą Wróblewskiego.

Aktywność dehydrogenazy podaje się w jednostkach Wróblewskiego.

Jednostka Wróblewskiego- taka aktywność enzymu w 1 cm³ surowicy, która:

•    W temp 25stC

•    Objętości 3 cm³

•    Przy 340 nm

•    1 = 1 cm

daje w czasie 1 min zmianę absorbancji NADH o 0,001.

W praktyce przez porównanie aktywności standardowej LDH z aktywnością uwolnionej do osocza dehydrogenazy mleczanowej można określić przeżywalność komórek.