Kultury tk, Kultury kalusa, Kultury kalusa


Kultury kalusa

Naturze formowanie tkanki kalusowe (przyrannej) to odp. Rośliny na urazy mech., spowodowane infekcją mikroorg lub uszkodzeniami przez zwierzęta roślinożerne. Warunkach In vitro kalus może powstawać z każdego elementu żywej tkanki czy organu wyizolowanego z rośliny macierzystej i umieszczonego na pożywce zaw, odp. Subst. Odż. Oraz regulatory wzrostu i rozwoju, gł auksyny.

Tempo powstawania kalusa

Zal. m.in. od budowy explantatu.

Explantaty zaw tylko kom merystematyczne szybko tworzą kalus

Jeśli w explantacie najdują się gł kom zróżnicowane, ulegają one najpierw odróżnicowaniu i stają się merystematyczne a poźniej w wyniku powtórnego różnicowania siętw kalus (2-4tygodnie)

Kalus może powst. Tylko w miejscu cięcia rośliny jak tez całej pow explantatu.

Kultury kalusa

Po uformowaniu na explantacie, kalus zazwyczaj odcina się i przenosi się na nowe pożywki (pasażowanie) celem dalszego namnożenia kom. a potem stymuluje się regenerację roślin

Injekcja kalusa odbywa się zwykle w ciemności, natomiast regeneracja i namnażanie może zach. Zarówno w ciemności jak i na świetle .

POWSTAJĄCE W ULTURACH IN VITRO KALUSY RÓŻNIĄ SIĘ

Różnice te wynikają min z pochodzenie i rodzaju explantatu, skł chem. Pożywki, wieku kalusa oraz war prowadzenia kultury.

HABITUACJA (alergizacja)

To zjawisko stopniowego uniezależnienia siękalusa od egzogennych auksyn lub cytokinin oraz przystosowanie się do wzrostu na pożywce bez lub przy znacznym obniżeniu ich zawartości.

Zjawisko habituacji względem auksyn i cytokinin mogą występować niezależnie lub jednocześnie w tym samym kalusie.

Habituacja może takzę dotyczyć innych substancji odżywczych pożywce.

WYKORZYSTANIE KALUSA

KULTURY ZAWIESIN KOMÓREK

Zawiesina komórek to populacja poj. Komórek lub niewielkic agregatów komórkowych, intensywnie rosnąca w rytmicznie wytrząsanej pożywce płynnej, char. Się powtarzalnymi war wzrostu.

Do inicjacji kultur zawiesinowych wykorzystuje się:

Kultury zawiesinowe prowadzi sięzwykle w kolbach stożkowych umieszczonych na wytrząsarce rotacyjnej, zarówno w ciemności jak i na świetle o niezbyt dużym natężeniu.

ETAPY KULTURY ZAWIESINOWEJ

Wyrost liczby komrek + parametr poywalajcz ocenic zachowanie się komórek w zawiesinie. Tempo wzrostu iczby kom w ciągu całego cyklu, od pasażu do pasażu, zminia sięw charakterystyczny sposób, tworząc krzywą wzrostu. Standardowa krzywa wzrostu - kształt sinusoidalny i można w niej wyznaczyć 5 faz:

  1. Spoczynkowa

  2. Wykładnicza

  3. Wzrostu liniowego

  4. Obniżonego wzrostu

  5. Stacjonarna

KULTURY ZAWIESIN KOMÓREK SĄ DOBRY OBIEKTEM ROZMAITYCH BADAN

W PRAKTYCE WYKORZYSTYWANE SĄ M.IN. DO:

KULTURZ PROTOPLASTÓW

Prostoplast to kom. roślinna bez ściany kom.

Żywy protoplast po przeniesieniu na odp. Pożywkę odtwarza scianękomórkową i rozpoczyna podziały mitotyczne. Początkowo torzą się małe agregaty komórek (mikrokalusy) a następnie, poprzez morfogenezę rzybyszow dochodzi do regeneracji roślin.

Protoplasty izoluje się z:

IZOLOWANIE PROTOPLASTÓW

Metody enzymatyczne - enzymy rozkładające ścianę komórkową t.j. celulozy, hemicelulozy i pektynazy. Wybrany materiał roślinny inkubuje się w roztworze zawierającym oprócz mieszaniny enzymów także regulatory ciśnienia osmotycznego np. mannitol, sorbitol i sacharozę oraz sole mineralne i witaminy. Izolację protoplastów prowadzi się w temp. 25-28 st.C przez 2-6 godz w ciemności.

Ocena i żywotności i liczebności protoplastów - prawidłowo wyizolowane i żywe protoplasty mająkształt kulisy z wraźnie widocznym ruchem cytoplazmy. Żywotność protoplastów sprawdza siębarwnikami cytoplazmatycznymi barwiącymi tylko żywe lub tylko martw protoplasty

Oczyszczanie protoplastów - usunięcie mieszaniny enzymów oraz resztek nierozłożonych kom i tkanek roślinnych. W tym celu protoplasty filtruje sięprzez sitka o bardzo małej średnicy oczek, a następnie wiruje, np. w roztworze sacharozy. W tym przypadu żywe protoplasty zbierają się na pow płynu a martwe opadają na dno. Po odwirowaniu czyste protoplasty kilkukrotnie przepłukuję się pożywką i dopiero wtedy przenosi się na pożywki odpowiednie dla dalszych etapów.

Kutury protoplastów

Założenie kultury wyizolowanych protoplastów.

Czystąfrakcję protoplastów zawiesza sięw pożywce agarozowej lub w postaci cienkiej warstwy zawiesiny umieszcza sięna powierzchni pożywki agarowej. Protoplastu odtworząsćiany komórkowe i w wyniku podziałów powstaną mikrokalusy. Dalszy etap jest uzależniony od założonego celu ( proliferacja kalusa, morfogeneza przybyszowa, regeneracja roślin).

Wszystkie etapy pracy wmagajązachowania maksymalnej sterylności, dokładności i delikatności - zapewnienie żywotności protoplastów.

KULTURY PROTOPLASTÓW

Prowadzi się celem:

FUZJONOWANIE PROTOPLASTÓW

Fuzja jest to łączenia się (zlewanie się) protoplastów pochodzących z różnych komórek w kulturach In vitro możliwe jest przeprowadzenie fuzji pomiędzy protoplastami komórek somatycznych pochodzących od tej samej rośliny lub różnych roślin tego samego lub różnych gatunków.

Fuzja In vitro HYBRDYZACJA SOMATYCZNA (krzyżowanie somatyczne) pozwala ominąc naturalne bariery (przed- i pozygotyczne) zapobiegające krzyżowaniu sięrośłin między gatunkami, rodzajami czy rodzinami

Celem jest:

ETAPY FUZJI:

  1. Bezpośredni kontakt błon protoplastów ( neutralizacja ujemnego ładunku pow. Błon)

  2. Czasowa destabilizacji błon (zmiana przepuszczalności, pofałdowania, tw. Się porów)

  3. Wytworzenia połączeń (tzw. Mosty błonowe lub molekularne) między cytoplazmami stykających się protoplastów

  4. Zlanie się cytoplazmy wraz z organellami

  5. Odtworzenie i otoczenie produktu fuzji wspólną błoną komórkową

W WYNIKU FUZJI POWSTAJĄ

Ostatecznie po fuzji mogą powstać:

FUZJA (METODY)

Fuzja chemiczna - stymulatorem procesu jest glikol polietylenowy (PEG) w połączeniu z dużym stężniem jonów Ca i DMSO. Po krótkiej inkubacji w mieszaninie protoplasty przemywa się fosforem zawierającym jony Ca i wprowadza pożywkę, następuje odtworzenie ściany komórkowej oraz kolejne fazy rozwoju komórek.

Fuzja fizyczna (elektrofuzja) - wykorzystuje impulsy elektryczne do łączenia się protoplastów. Mieszaninę protoplastów umieszcza się w naczyniu pomiędzy dwiema elektrodami. W pierwszym etapie, pod wpływem prądu zmiennego protoplasty ustawiają się wzdłóż linii pola elektrycznego, tworząc charakterystyczne sznury a ich błony stykają sicze sobą. W drugim etapie w wyniku krótkotrwałego impulsu prądu stałego następuje elektroporacja błon.



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Przykładowe-pytania-i-zagadnienia-na-egzamin-z-kultur-tk.-2013 (1), Semestr VI, Kultury tkankowe i k
Kultury tk, ZDROWOTNOŚĆ, ZDROWOTNOŚĆ
Metoda animacji społecznej (Animacja społeczno kulturalna)
Kultura stalinizmu
Kultura
Kultura Masowa
Antropologia kultury
3 KULTURA I JEJ WPYW NA YCIE SPOECZNE
Czas w kulturze ped czasu wolnego
Język w zachowaniach społecznych, Wykład na I roku Kulturoznawstwa (1)
Wykład 9 Kultura typy i właściwości
ANIMACJA KULTUROWA
Wstęp do Kulturoznawstwa 6 7
5 WSPÓLNOTY KULTUROWE

więcej podobnych podstron