3784495993

Załącznik nr 2. Tomasz Mroczek - Autoreferat w języku polskim

W pierwszym podejściu [7] zastosowałem sorbent typu mixed-mode, Oasis MCX i frakcje alkaloidowe były eluowane mieszaniną metanol-10% r-r wodorotlenku amonu (3:1, v/v). Badałem odzysk galantaminy, likoryny i hippeastryny na 3 poziomach stężeń i w 2 matrycach roślinnych. Zanotowałem bardzo wysokie odzyski wszystkich alkaloidów bez względu na rodzaj matrycy roślinnej na poziomie 80-100%. Czyste frakcje alkaloidowe były następnie analizowane metodami HPTLC-densytometria-UV oraz RP-HPLC-DAD (p.    4.3).

Opracowana metoda SPE okazała się niezwykle przydatna w takim podejściu analitycznym. Zastosowanie metody separacji oraz analizy alkaloidów Amaryllidaceae w oparciu o technikę HPLC/DAD/ESI-TOF-MS skłoniło mnie do opracowania innej metody SPE, która z jednej strony zapewniłaby usunięcie polarnych balastów nie-alkaloidowych, a z drugiej byłaby w pełni zintegrowana ze źródłem jonów typu ESI (publikacja [8]). W tym celu zastosowałem sorbent typu HLB (hydrophilic-lipophilic balance), który na początku w celu zwiększenia retencji alkaloidów był kondycjonowany fazą wodno-organiczną o pH alkalicznym, a do elucji użyłem eluent o pH kwasowym z dodatkiem reagentów oraz substancji jonowych, które gwarantują wytworzenie wysokiego natężenia jonów w źródle typu ESI. Takie podejście do ekstrakcji SPE alkaloidów Amaryllidaceae zostało opisane w literaturze naukowej po raz pierwszy. Ponownie badałem odzyski po wzbogaceniu wzorcami 3 matryc roślinnych. Odzyski były bardzo wysokie w przedziale 85-100%, co potwierdza wysoką przydatność tej metody SPE do oczyszczania próbek zawierających alkaloidy Amaryllidaceae.

Wyniki badań nad procesami ekstrakcji, oczyszczania i zatężania próbek zawierających związki alkaloidowe prezentowałem również podczas następujących wystąpień na konferencjach krajowych i zagranicznych: [Wl], [W2], [W4], [W5], [W6],

4.3 Analiza oraz identyfikacja związków alkaloidowych oraz wybranych nie-alkaloidowych w oparciu o techniki chromatograficzne, ze szczególnym uwzględnieniem metod:    (HPTLC-densytometria-UV; HPLC/DAD; HPLC/DAD/APCI-IT-MS;

HPLC/DAD/ESI-TOF-MS), oraz analiza NMR wyizolowanych związków - publikacje [1], [2], 13], [5], [6], [7], |8|, [9], |10] oraz wystąpienia [Wl], |W2], [W3|, [W4|, ]W5], |W6], [W7|

4.3.1. Metody oparte na HPTLC-densytometrii-UV oraz (vs) RP-HPLC/DAD

12