3784495995

Załącznik nr 2. Tomasz Mroczek - Autoreferat w języku polskim cm umożliwił separację A-tlenku skopolaminy oraz A-metyi obroni ku skopolaminy. Opracowana metoda HPTLC w połączeniu z densytometrią-UV umożliwiła analizę ilościową tych związków obecnych w ekstraktach z rodzaju Datura sp. oraz w ekstraktach wzbogaconych o te substancje wzorcowe. Z racji bardzo wydajnej metody SPE (p. 4.2) nie było konieczności zastosowania derywatyzacji, a skany wykonywano jedynie przy 205 nm. Metodę tę zwalidowano w zakresie precyzji Rf, limitu detekcji (LOD) oraz limitu oznaczenia ilościowego (LOQ). Wartości LOD były stosunkowo niskie i mieściły się w przedziale 0,73-0,95 ng/pl (S/N 3:1). Wyniki densytometrii skorelowałem również z drugą metodą analityczną w oparciu o analizę RP-HPLC/DAD na sorbencie typu charge transfer (XTerra-RP18) oraz w gradiencie acetonitrylu w 15mM r-rze wodorotlenku amonu, wykazując wysoką korelację obu tych metod w zakresie analizy ilościowej różnych alkaloidów tropinowych (współczynniki korelacji r były w przedziale 0,92086-0,99995, odpowiednio dla hioscyjaminy i skopolaminy), co potwierdza wysoką przydatność obu tych metod (metoda RP-HPLC/DAD była 1,5-7 bardziej czuła) w analizie ilościowej różnych alkaloidów tropinowych obecnych w ekstraktach roślinnych.

W kolejnych dwóch publikacjach [7] i [8] opisałem efektywne i nieskomplikowane metody analizy jakościowej i ilościowej różnych typów alkaloidów Amaryllidaceae jak: galantamina i pochodne, likoryna i pochodne, czy też hippeastryna i związki pokrewne, opierające się na rozdzieleniu na płytkach HPTLC z żelem krzemionkowym oraz densytometrii-UV. Stwierdziłem porównywalną efektywność zbliżonych do siebie faz ruchomych złożonych z chloroformu, metanolu i 25% r-ru wodorotlenku amonu (9:0,5:0,5; v/v/v oraz 8:1:1, v/v/v). Z racji różnic w widmach UV tych 3 głównych grup alkaloidów Amaryllidaceae (galantamina i pochodne 207 nm, likoryna i pochodne 290 nm i hippeastryna i pochodne 313 nm), możliwe było rozróżnienie tych grup związków w badaniach skringowych HPTLC. Oba systemy chromatograficzne zostały w pełni zwalidowane w zakresie precyzji parametrów Rp, wyznaczenia LOD i LOQ, precyzji nastrzyku, precyzji pośredniej inter- i intra-day RSD, parametrów krzywych kalibracji oraz korelacji widm UV. Metody te okazały się bardzo czułe umożliwiając analizę ilościową już przy nastrzyku alkaloidu na poziomie 5-10 ng/plamkę [7] i [8], Charakteryzowały się również wysoką precyzją nastrzyku, a także zanotowałem stosunkowo niskie wartości inter- i intra-day RSD [7] i [8], co potwierdza przydatność tych metod w rutynowej analizie HPTLC-densytometrycznej różnych typów alkaloidów Amaryllidaceae obecnych w ekstraktach roślinnych.

W podobny sposób jak to było opisane dla analizy alkaloidów tropanowych [6] wykonałem również analizę RP-HPLC/DAD ekstraktów z roślin z rodziny Amaryllidaceae

14