3784503784

ZAŁĄCZNIK 2 Strona 20 z 42

Ocena przeciwbakteryjnych cewników ze sparfloksacyną otrzymanych według procedury patentowej nr 208173

Modyfikacji poddałam cewniki urologiczne różnych producentów: dwudrożne i trójdrożne cewniki moczowe wykonane z naturalnego lateksu, pokryte płynnym silikonem lub silikonowym elastomerem, produkowane przez Tyco Healthcare/Kendall (UK), Rusch (Niemcy), Unomedical Sdn. Bhd. (Malezja) oraz Coloplast, (Niemcy).

Do charakteryzacji zmodyfikowanej powierzchni cewników zastosowałam skaningową mikroskopię elektronową (SEM) i spektroskopię w podczerwieni z transformacją fouriera - metodą osłabionego całkowitego wewnętrznego odbicia (ATR -FTIR) celem potwierdzenia obecności heparyny i sparfloksacyny. Zarejestrowane zdjęcia SEM pokazały znaczące różnice w topografii powierzchni badanych cewników (cewnika ni em ody fi kowanego, cewnika pokrytego heparyną i cewnika pokrytego heparyną i poddanego następnie działaniu sparfloksacyny) wskazując na obecność zmodyfikowanej warstwy heparyny (grubość ok. 100 pm). Widma ATR-FTIR otrzymane dla cewnika pokrytego heparyną ze związaną sparfloksacyną po każdym etapie modyfikacji powierzchni porównane z widmami ATR-FTIR niemodyfikowanego cewnika i czystych substancji heparyny i sparfloksacyny pokazują zmiany chemicznej struktury powierzchni świadczące o obecności heparyny w pierwszym etapie modyfikacji i sparfloksacyny w drugim etapie modyfikacji. Z dokładnej analizy widm ATR-FTIR otrzymanych dla próbek cewników płukanych i niepłukanych można wywnioskować, że sparfloksacyną wiąże się z powierzchnią cewnika uprzednio pokrytego heparyną w sposób mieszany: niekowalencyjnie i kowalencyjnie poprzez wiązania Schiffa (-CH=N-).

Charakterystyka zmodyfikowanych cewników została zaprezentowana w pracy oryginalnej opublikowanej jako artykuł w czasopiśmie:

Dorota Kowalczuk. Grażyna Ginalska. Joanna Golus. Characterization of the developed antimicrobial

urological catheters. Int. J. Pharm. 2010; 402: 175 - 183.

W celu uzyskania efektywnego wiązania antybiotyku zoptymalizowałam warunki procesu immobilizacji ustalając m.in. optymalne środowisko reakcji immobilizacji, czas wiązania antybiotyku, optymalne stężenia poszczególnych reagentów biorących udział w procesie. W celu określenia poziomu sparfloksacyny w płynach przygotowanych do immobilizacji i otrzymanych po immobilizacji zastosowałam opracowaną metodę HPLC z detekcją spektrofotometryczną i fluorescencyjną, którą stosowałam również do oceny