Biochemia dla Biologii nr ETCS

Oznaczanie kwasu askorbinowego w materiale biologicznym

Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii

Przedmiot prowadzony przez Katedrę Biochemii

1

ZADANIE 6

TYTUŁ: OZNACZANIE KWASU ASKORBINOWEGO W MATERIALE BIOLOGICZNYM

Forma zaliczenia: Kolokwium z części teoretycznej do ćwiczeń oraz praktyczne zaliczenie
ć

wiczeń

Materiały i urządzenia:

• Materiały

1. warzywa i owoce przyniesione przez studentów
2. roztwór kwasu askorbinowego
3. 2,6-dichlorofenoloindofenolu
4. 3% kwas metafosforowy

• Urządzenia

1. probówki
2. biurety
3. zlewki
4. pipety
5. moździerze

INFORMACJE TEORETYCZNE:.

Wyznaczenie miana ma na celu określenie ilości mililitrów stosowanego roztworu

barwnika na 1 mg kwasu askorbinowego. Roztwór barwnika jest nietrwały, dlatego jego
miano nastawia się bezpośrednio przed doświadczeniem.

Kwas L-askorbinowy redukuje barwnik 2,6-dichlorofenoloindofenol, sam zaś ulega

utlenieniu do kwasu dehydroaskorbinowego. Oznaczanie kwasu askorbinowego polega na
miareczkowaniu ww. barwnikiem ekstraktu z materiału biologicznego w kwaśnym
ś

rodowisku, co zapobiega samoutlenieniu kwasu askorbinowego tlenem z powietrza oraz

chroni przed działaniem oksydaz. Barwnik jest zarazem indykatorem. Po wyczerpaniu
witaminy C zabarwia on miareczkowana próbę na kolor bladoróżowy.

Przebieg doświadczenia:

Podzadanie 1: wyznaczenie miana roztworu 2,6-dichlorofenoloindofenolu

Roztwór kwasu askorbinowego o znanym stężeniu zmiareczkować roztworem

barwnika, wynik podać w ml barwnika/ mg kwasu.

Podzadanie 2: oznaczenie witaminy C w materiale biologicznym

Odważyć 2 g mokrej tkanki (ziemniaki, kapusta, cytryna, jabłko, pomidor,

pokrzywa, owoce jarzębiny, itp.) i rozetrzeć w moździerzu z 5 ml 3% kwasu
metafosforowego. Roztartą miazgę przenieść ilościowo do cylinderka i uzupełnić
do 10 ml kwasem metafosforowym. Przesączyć, z przesączu odmierzyć 1 do 5 ml
i miareczkować mianowanym roztworem barwnika aż do utrzymującej się 30 s
barwy różowej. Wykonać miareczkowanie próby ślepej, tzn. użytego kwasu
metafosforowego. Wartość uzyskaną odjąć od otrzymanej w próbie właściwej.
Wyniki przedstawić w tabelach.

Biochemia dla Biologii nr ETCS

Oznaczanie kwasu askorbinowego w materiale biologicznym

Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii

Przedmiot prowadzony przez Katedrę Biochemii

2

A

B

C

D

E = 0,2 [g/ml] x D

S = (C-B) x 100 [g] /

(A x E)

Miano
barwnika,
[ml/mg]

Miareczko-

wanie próby

ślepej, [ml]

Miareczko-

wanie próby

badanej, [ml]

Obj. przesączu

pobrana do

oznaczenia, [ml]

Masa próbki

pobrana do

oznaczenia, [g]

Zawartość kwasu
askorbinowego w

100 g próbki, [mg]

Dzienna dawka witaminy C dla dorosłego człowieka wynosi 60 mg. Oblicz ilość materiału
biologicznego, który zaspokajałby dzienne zapotrzebowanie na te witaminę.

L.p

.

Badany materiał biologiczny

Ilość zaspakajająca dzienne zapotrzebowanie na

witaminę C u dorosłego człowieka, [g]

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

12.

Wniosek:
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................

Biochemia dla Biologii nr ETCS

Oznaczanie kwasu askorbinowego w materiale biologicznym

Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii

Przedmiot prowadzony przez Katedrę Biochemii

3

LITERATURA

1. Biochemia”, L. Stryer, PWN, Warszawa 1997 i nowsze

2. „Biochemia Harpera”, R. K. Murray i wsp., PZWL, Warszawa 1995 i nowsze

3. Cytobiochemia”, L. Kłyszejko-Stefanowicz, PWN, Warszawa 1995, 2002

4. Biochemia- Krótkie Wykłady”, B. D. Hames i wsp., PWN, Warszawa 2002

5. Zarys Biochemii Cz.1, Karlson P., Pwn W-Wa 1987

6. Biochemia witamin PWN, Moszczyński, Pyć w-wa 1998

7. Biochemia kręgowców, Minakowski W. PWN W-wa 1998

8. Fizjologia komórki, Giese A., PWN W-wa 1985

9. Chemia bionieorganiczna, Kafarski P., Lejczak B. PWN Warszawa 1994

10. Elementy enzymologii, Wytwicki J. i inni, PWN 1989

11. Podstawy biofizyki, Pilawski, PWN Warszawa

12. Podstawy cytofizjologii, Kawiak J. i inni PWN, Warszawa 1996

13. Ćwiczenia z biochemii”, L. Kłyszejko-Stefanowicz, PWN, Warszawa 1999, 2003

14. Ćwiczenia z biochemii, Strzeżek J wyd. ART. 1997

15. Ćwiczenia z biochemii, Logoń A. wyd. ART. 1997