1

Laboratorium z biochemii

„Wykrywanie cukrowców kwasów nukleinowych (DNA)

w ekstrakcie drożdżowym.”

Data ćwiczenia: 20.10.15

Skład sekcji:

Marta CZEKAJ

Agata CZEMERAJDA

Weronika SERAFIMOWICZ

Natalia POTRZEBOWSKA

2

I.

WYKONANIE DOŚWIADCZENIA

Otrzymanie ekstraktu drożdżowego:

- Do zlewki przeniesiono kilka gramów drożdży piekarskich, a następnie dodano 250 ml
wody.
- Z tak otrzymanego ekstraktu pobierano odpowiednie ilości do prób na obecność cukrowców
oraz DNA.

1. Próba Molischa – odróżnianie cukrowców od innych związków organicznych:



Do probówki odmierzono 1 ml ekstraktu oraz dodano 4 ml odczynnika Molischa.



Podwarstwiono trzema mililitrami stężonego kwasu siarkowego pipetą po ściance skośnie
ustawionej probówki.

2. Próba Biala na pentozy:



Do probówki odmierzono 5 ml odczynnika Biala i ogrzewano we wrzącej łaźni wodnej

przez 5 minut.



Następnie do probówki wprowadzono 1 ml badanego roztworu.



Ogrzewano przez kilka kolejnych minut w łaźni wodnej.

3. Wykrywanie DNA metodą dwufenyloaminową:



Do probówki wprowadzono 1 ml badanego roztworu oraz 4 ml odczynnika
dwufenyloaminowego.



Ogrzewano we wrzącej łaźni wodnej przez 10 minut.

4. Wykrywanie kwasu fosforowego:



Do probówki odmierzono 1 ml ekstraktu drożdżowego.



Dodano 2-3 krople roztworu amoniaku do uzyskania alkalicznego odczynu.



Ciecz zakwaszono stężonym kwasem azotowym (V) i dodano 3 ml molibdenianiu amonu.



Ogrzewano w łaźni wodnej do wrzenia.

5. Reakcja Feulgena na deoksyrybozę:



Do probówki odmierzono 1 ml ekstraktu drożdżowego.



Dodano 2 krople 1M roztworu HCl.



Probówkę umieszczono we wrzącej łaźni wodnej na 5 minut.



Po oziębieniu doprowadzono pH do 5 przy pomocy 0.1 M roztworu NaOH.



Następnie dodano około 25 kropel odczynnika Schiffa.

3

II.

OBSERWACJE

1. Próba Molischa – zaobserwowano w probówce fioletowy krążek i zielone zabarwienie

poniżej krążka.

2. Próba Biala - po dłuższym czasie inkubowania zaobserwowano utworzenie się kompleksu o

barwie zielonej.

3. Wykrywanie kwasu fosforanowego – utworzył się kompleks o żółtym zabarwieniu.

4. Wykrywanie DNA metodą dwufenyloaminową – zaobserwowano utworzenie się

niebieskiego zabarwienia.

5. Reakcja Feulgena na deoksyrybozę – uzyskano czerwone zabarwienie w probówce.

1

2

3

4

5

4

III.

WNIOSKI:

W próbie Molischa zaobserwowano fioletowy krążek, który świadczy o obecności cukrowca

(heksozy lub pentozy) w badanym ekstrakcie drożdżowym, zaś zielona barwa poniżej

pierścienia mówi o zanieczyszczeniach pochodzących z α-naftolu.

Wykonana próba Biala świadczy o obecności pentoz. Te pod wpływem ogrzewania reagują

z orcyną w kwaśnym środowisku dając zielona barwę.

Wykrywanie DNA metodą dwufenyloaminową mówi nam, że w badanej próbie występuje

kwas dezoksyrybonukleinowy, ponieważ otrzymaliśmy barwny kompleks (niebieski) podczas

ogrzewania probówki z ekstraktem drożdżowym, kwasem siarkowym, dwufenyloaminą oraz

kwasem octowym.

Kwaśny roztwór molibdeny amonu wraz z ortofosforanem (obecym w badanej próbie)

doprowadził do powstania żółtej barwy, co świadczy o obecniości soli amonowej kwasu

4-trójmolibdenianofosforanowego.

Przeprowadzona reakcja Feulgena z udziałem kwasu solnego i fuksyny ukazała nam barwę

różowo-czerwoną, co świadczy o obecności w ekstrakcie drożdżowym deoksyryboz.