Wybrane metody

Wybrane metody

w diagnostyce

w diagnostyce

immunologicznej

immunologicznej

dr n.med. Monika Kniotek

dr n.med. Monika Kniotek

Zakład Immunologii Klinicznej

Zakład Immunologii Klinicznej

Instytut Transplantologii WUM

Instytut Transplantologii WUM

Niedobory odporności - Jednostki
chorobowe



Zespół hemofagocytarny- pancytopenia

(niedobór

prawidłowych erytrocytów, leukocytów, trombocytów),

przerost

śledziony, fagocytoza szpiku kostnego; immunologia- niska
aktywność komórek NK wysoki poziom sCD25.



SCID - ciężkie złożone niedobory odporności: brak T i B;



SCID-ADA- (niedobór deaminazy adenozyny)- spadek ilości i
proliferacji T, niska aktywność komórek NK



Zespól Di Gorga – delecja, aplazja grasicy – brak limfocytów
T



Zespól Hioba-brak INF-γ, brak chemotaksji neutrofilów,
podwyższone stężenie IgE



CVID- zespół hipogammaglobulinemi IgA, IgM,IgG



Zespół Nijmengen- niedokrwistość, trombocytopenia,
obniżenie stężenia IgE, spadek liczby l.T,l.B, spadek
stosunku CD4/CD8, podwyższenie liczby komórek NK ,
dysgammaglobulinemia

Objawy niedoborów odporności

Objawy niedoborów odporności

1. Dwa lub więcej nowych zakażeń ucha w ciągu roku.

1. Dwa lub więcej nowych zakażeń ucha w ciągu roku.

2. Dwa lub więcej nowych zakażeń zatok w ciągu roku, przy braku alergii.

2. Dwa lub więcej nowych zakażeń zatok w ciągu roku, przy braku alergii.

3. Jedno zapalenie płuc rocznie w ciągu co najmniej 2 lat.

3. Jedno zapalenie płuc rocznie w ciągu co najmniej 2 lat.

4. Przewlekła biegunka z utratą masy ciała.

4. Przewlekła biegunka z utratą masy ciała.

5. Nawracające zakażenia wirusowe (przeziębienia, opryszczka,

5. Nawracające zakażenia wirusowe (przeziębienia, opryszczka,

brodawki, kłykciny).

brodawki, kłykciny).

6. Konieczność częstego stosowania antybiotyków dożylnych w leczeniu

6. Konieczność częstego stosowania antybiotyków dożylnych w leczeniu

zakażeń.

zakażeń.

7. Nawracające, głębokie ropnie skóry lub narządów wewnętrznych.

7. Nawracające, głębokie ropnie skóry lub narządów wewnętrznych.

8. Uporczywe pleśniawki lub zakażenia grzybicze na skórze lub w innej

8. Uporczywe pleśniawki lub zakażenia grzybicze na skórze lub w innej

lokalizacji.

lokalizacji.

9. Zakażenie normalnie nieszkodliwymi prątkami niegruźliczymi.

9. Zakażenie normalnie nieszkodliwymi prątkami niegruźliczymi.

10. Pierwotny niedobór odporności w wywiadzie rodzinnym.

10. Pierwotny niedobór odporności w wywiadzie rodzinnym.

Pierwotne Niedobory Odporności należy podejrzewać, jeżeli wystąpią 2

Pierwotne Niedobory Odporności należy podejrzewać, jeżeli wystąpią 2

lub więcej z powyższych objawów ostrzegawczych.

lub więcej z powyższych objawów ostrzegawczych.

Diagnostyka niedoborów

odporności

Diagnostyka wstępna

:

badania przesiewowe umożliwiające ocenę każdego elementu układu

immunologicznego

* pełna morfologia krwi obwodowej z oceną obrazu odsetkowego

leukocytów:agranulocytoza, ziarnistości, niedokrwistość

hemolityczna, małopłytkowość, limfopenia

* stężenie immunoglobulin w surowicy krwi –IgG, IgM, IgA, Ig całkowite

> 400 mg/dl, IgG >20mg/dl

* testy nadwrażliwości typu późnego
Trichophyton, Candida,tuberkulina

Diagnostyka specjalistyczna

:•

* Podklasy IgG –IgG2, IgG4-zdolność do syntezy swoistych przeciwciał
* Liczba limfocytów, subpopulacje: B - CD19, CD20, T -CD3, CD4, CD8,

wskaźnik CD4/CD8, ekspresja MHC kl. II (HLA_DR)

* Funkcje limfocytów-proliferacja limfocytów pod wpływem mitogenów:

B - EBV, SAC; T–PHA,OKT-3

* Funkcje granulocytów: test NBT, chemiluminescencja, wytwarzanie

rodników tlenowych, chemotaksja, cząsteczki adhezyjne CD11, CD18

* Ocena składowych dopełniacza, czynników B, P, CH50
* Ocena aktywności enzymów ADA, PNP
* Genetyka

I. Testy proliferacji (transformacji blastycznej)

1. Metoda izotopowa
2. Metoda kolorymetryczna

II. Ocena odpowiedzi humoralnej
1. Metoda ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)
2. Test PFC (plaque forming cell assay)

III. Test aktywności komórek NK (natural killer cells)

IV. Wybrane testy służące do oceny mechanizmów odporności

nieswoistej

1. Oznaczenie poziomu składników dopełniacza w surowicy
2. Ocena zdolności granulocytów do fagocytozy
a) fagotest (NBT)
b) test redukcji cytochromu C

V. MLC (mixed lymphocytes culture)

1. transplantacja szpiku
2. nawracające poronienia

Izolacja limfocytów T z krwi

Izolacja limfocytów T z krwi

obwodowej

obwodowej

I. Test proliferacji

I. Test proliferacji

( Ciężki złożony niedobór odporności - SCID, zespół Di Goerge, zespół

( Ciężki złożony niedobór odporności - SCID, zespół Di Goerge, zespół

Nezelofa- dysplazja grasicy, Niedobór odporności związany z chromosomem - X )

Nezelofa- dysplazja grasicy, Niedobór odporności związany z chromosomem - X )

Ocena odpowiedzi proliferacyjnej limfocytów T i B - określenie zmiany liczby

Ocena odpowiedzi proliferacyjnej limfocytów T i B - określenie zmiany liczby

komórek w hodowli przed i po zadziałaniu czynnika stymulującego

komórek w hodowli przed i po zadziałaniu czynnika stymulującego

1.Metoda

1.Metoda

izotopowa

izotopowa



izolacja komórek jednojądrzastych (MNC) z krwi przez wirowanie w

izolacja komórek jednojądrzastych (MNC) z krwi przez wirowanie w

gradiencie stężeń

gradiencie stężeń



hodowla przez 3 dni w 37

hodowla przez 3 dni w 37

0

0

C w atmosferze uzupełnianej 5%CO

C w atmosferze uzupełnianej 5%CO

2

2

w obecności

w obecności

opowiedniego mitogenu

opowiedniego mitogenu



dodanie znakowanej trytem tymidyny (ilość wbudowanego nukleotydu

dodanie znakowanej trytem tymidyny (ilość wbudowanego nukleotydu

zależy od intensywności replikacji DNA – częstość podziałów komórkowych)

zależy od intensywności replikacji DNA – częstość podziałów komórkowych)



po 17h inkubacji komórki lizuje się a ich DNA zostaje związane na filtrze

po 17h inkubacji komórki lizuje się a ich DNA zostaje związane na filtrze



ilość wbudowanego izotopu ocenia się poprzez pomiar w liczniku

ilość wbudowanego izotopu ocenia się poprzez pomiar w liczniku

scyntylacyjnym

scyntylacyjnym



wynik podawany jest jako wartość liczbowa cpm – liczba zliczeń na min

wynik podawany jest jako wartość liczbowa cpm – liczba zliczeń na min

Związki te działają :

Związki te działają :

-

poprzez receptory powierzchniowe komórki np. TCR lub CD2 (anty-CD3)

poprzez receptory powierzchniowe komórki np. TCR lub CD2 (anty-CD3)

-

bezpośrednio na wewnątrzkomórkowy szlak aktywacji (PMA)

bezpośrednio na wewnątrzkomórkowy szlak aktywacji (PMA)

MITOGEN

limfocyty

T

limfocyty B

limfocyty T i

B

PHA

fitohemmaglutyn

ina

+

Con A

Konkanawalina

A

+

Przeciwciała

anty-CD3 (OKT-

3)

+

SAC

Staphylococcus

aureus szczep

Cowan

+

Przeciwciała –

anty Ig

+

PWM

Mitogen

szkarłatki

+

PMA

Octan

mirystynianu

forbolu

+

Wbudowanie tymidyny do DNA

2.Metoda MTT ( MTTS, XTT,WSTs)

2.Metoda MTT ( MTTS, XTT,WSTs)

Metoda kolorymetryczna oceniająca proliferację komórek

Metoda kolorymetryczna oceniająca proliferację komórek

oraz ich żywotność

oraz ich żywotność

Metoda oparta jest na redukcji soli tetrazolowych np.: MTT

Metoda oparta jest na redukcji soli tetrazolowych np.: MTT

(bromek 3-(4-5 dimetrylotiazol 2yl)-2,5-difenyloteterazolu)

(bromek 3-(4-5 dimetrylotiazol 2yl)-2,5-difenyloteterazolu)

(żółty

(żółty

tetrazol

tetrazol

) zostaje zredukowany przez mitochondrialną

) zostaje zredukowany przez mitochondrialną

reduktazę do czerwonego

reduktazę do czerwonego

formazanu.

formazanu.

10

10

3

3

- 10

- 10

5

5

komórek + medium +

komórek + medium +

MTT

MTT

inkubacja 24h, wytrącenie

inkubacja 24h, wytrącenie

kryształów formazanu

kryształów formazanu

dodanie detergentu

dodanie detergentu

odczyt ekstyncji w czytniku Elisa

odczyt ekstyncji w czytniku Elisa

Typowy obraz płytki z wynikiem testu MTT

II. Ocena produkcji przeciwciał

II. Ocena produkcji przeciwciał

in vitro

in vitro

(

(

APA-przeciwciała antyfosfolipidowe, zespół Hioba, pospolity zmienny niedobór

APA-przeciwciała antyfosfolipidowe, zespół Hioba, pospolity zmienny niedobór

odporności CVID, allergie, przemijająca hipogammaglobulinemia niemowląt, zespół

odporności CVID, allergie, przemijająca hipogammaglobulinemia niemowląt, zespół

Nijemegen)

Nijemegen)

1. Metoda ELISA

1. Metoda ELISA

(enzyme-linked immunosorbent assay)

(enzyme-linked immunosorbent assay)



ocena stężenia immunoglobulin obecnych w surowicy lub

ocena stężenia immunoglobulin obecnych w surowicy lub

supernatantach hodowlanych

supernatantach hodowlanych



pierwsze przeciwciało skierowane przeciw określonej klasie

pierwsze przeciwciało skierowane przeciw określonej klasie

immunoglobulin zostaje opłaszczone na powierzchni płytek

immunoglobulin zostaje opłaszczone na powierzchni płytek



po zablokowaniu miejsc niespecyficznego wiązania białka na

po zablokowaniu miejsc niespecyficznego wiązania białka na

płytkę nakłada się badaną surowicę

płytkę nakłada się badaną surowicę



związane immunoglobuliny wykrywane są za pomocą drugiego

związane immunoglobuliny wykrywane są za pomocą drugiego

przeciwciała sprzężonego z enzymem np. peroksydazą chrzanową

przeciwciała sprzężonego z enzymem np. peroksydazą chrzanową



enzym katalizuje reakcję barwną po dodaniu substratu

enzym katalizuje reakcję barwną po dodaniu substratu



zmiana koloru oceniana jest spektrofotometrycznie na czytniku

zmiana koloru oceniana jest spektrofotometrycznie na czytniku

ELISA

ELISA

Schemat oznaczania poziomu białek w supernatantach

Schemat oznaczania poziomu białek w supernatantach

hodowlanych metodą Elisa

hodowlanych metodą Elisa

odwrócona Elisa

odwrócona Elisa

Elispot

Elispot

Elispot readrer

2. Test PFC

2. Test PFC

(plaque forming cell

(plaque forming cell

assay)

assay)

Ocena ilości limfocytów B produkujących przeciwciała

Ocena ilości limfocytów B produkujących przeciwciała



izolacja komórek jednojądrzastych (MNC) z krwi przez wirowanie w

izolacja komórek jednojądrzastych (MNC) z krwi przez wirowanie w

gradiencie

gradiencie

stężeń

stężeń



inkubacja MNC przez 7 dni w 37

inkubacja MNC przez 7 dni w 37

0

0

C w atmosferze uzupełnianej 5%CO

C w atmosferze uzupełnianej 5%CO

2

2

z

z

mitogenem PWM (indukcja syntezy immunoglobulin)

mitogenem PWM (indukcja syntezy immunoglobulin)



dodanie do komórek z hodowli 0,8% agarozy z 30% zawiesiną SRBC

dodanie do komórek z hodowli 0,8% agarozy z 30% zawiesiną SRBC

opłaszczonych białkami A (białko

opłaszczonych białkami A (białko

S. aureus

S. aureus

wiążące IgG) oraz królicze

wiążące IgG) oraz królicze

przeciwciała przeciw ludzkim immunoglobulinom

przeciwciała przeciw ludzkim immunoglobulinom



wylanie tak przygotowanej zawiesiny na płytki Petriego opłaszczone 1%

wylanie tak przygotowanej zawiesiny na płytki Petriego opłaszczone 1%

agarozą

agarozą



inkubacja 60 min w temp 37

inkubacja 60 min w temp 37

0

0

C, dodanie dopełniacza, inkubacja 60 min

C, dodanie dopełniacza, inkubacja 60 min

w temp.37

w temp.37

0

0

C

C



po dodaniu dopełniacza następuje liza opłaszczonych przeciwciałami

po dodaniu dopełniacza następuje liza opłaszczonych przeciwciałami

krwinek, co

krwinek, co

powoduje powstanie charakterystycznych łysinek wokół komórki

powoduje powstanie charakterystycznych łysinek wokół komórki

produkującej

produkującej

przeciwciała

przeciwciała



1 łysinka=1limfocyt B wynikiem testu jest liczba plaków /500

1 łysinka=1limfocyt B wynikiem testu jest liczba plaków /500

tys.komórek

tys.komórek

III. Test aktywności komórek

III. Test aktywności komórek

NK

NK

(SCID-ADA –głębsza limfopenia, nowotwory, zakażenia wirusowe)

(SCID-ADA –głębsza limfopenia, nowotwory, zakażenia wirusowe)



Izolacja komórek jednojądrzastych (MNC) z krwi przez wirowanie w

Izolacja komórek jednojądrzastych (MNC) z krwi przez wirowanie w

gradiencie stężeń

gradiencie stężeń



przygotowanie komórek linii nowotworowej K

przygotowanie komórek linii nowotworowej K

562 ,

562 ,

inkubacja z DiO (3,3

inkubacja z DiO (3,3

’

’

–

–

diooctadecyloxacarbocyanine perchlorate –

diooctadecyloxacarbocyanine perchlorate –

zielony barwnik

zielony barwnik

fluorescencyjny)

fluorescencyjny)



komórki K

komórki K

562

562

+ limfocyty +

+ limfocyty +

jodek propidyny

jodek propidyny

(czerwony

(czerwony

barwnik fluorescencyjny barwiący martwe komórki)

barwnik fluorescencyjny barwiący martwe komórki)



inkubacja 4h

inkubacja 4h

w temp 37

w temp 37

0

0

C w atmosferze uzupełnianej 5%CO

C w atmosferze uzupełnianej 5%CO

2

2



odczyt w cytofluorometrze przepływowym

odczyt w cytofluorometrze przepływowym



wynikiem analizy jest % poziomu i aktywności komórek NK

wynikiem analizy jest % poziomu i aktywności komórek NK



ocena odsetka komórek CD16 w krwi obwodowej pacjenta (FACS)

ocena odsetka komórek CD16 w krwi obwodowej pacjenta (FACS)

Przykładowy dot plot z wyniku testu

Przykładowy dot plot z wyniku testu

aktywności komórek NK

aktywności komórek NK

IV. Wybrane testy służące do

IV. Wybrane testy służące do

oceny mechanizmów

oceny mechanizmów

odporności nieswoistej

odporności nieswoistej

1. Oznaczenie poziomu dopełniacza

1. Oznaczenie poziomu dopełniacza

Układ dopełniacza - swoiste białka krążące we krwi będące

Układ dopełniacza - swoiste białka krążące we krwi będące

mediatorami reakcji zapalnej.Nie wymagają uprzedniej

mediatorami reakcji zapalnej.Nie wymagają uprzedniej

ekspozycji na antygen.

ekspozycji na antygen.

Niedobory dopełniacza wywołują

Niedobory dopełniacza wywołują wrażliwość na zakażenia

bakteryjne i skłonność do chorób autoimmunizacyjnych

Układ dopełniacza rozpoznaje:

Układ dopełniacza rozpoznaje:

-

kompleksy

kompleksy

immunologiczne,

immunologiczne,

-

kompleksy

kompleksy

polisacharydowe

polisacharydowe

 

 

Aktywacja składników dopełniacza prowadzi do:

Aktywacja składników dopełniacza prowadzi do:

-

zwiększenia przepuszczalności naczyń krwionośnych,

zwiększenia przepuszczalności naczyń krwionośnych,

-

migracji leukocytów do ogniska zapalnego,

migracji leukocytów do ogniska zapalnego,

-

stymulacji procesu fagocytozy,

stymulacji procesu fagocytozy,

-

zwiększenia rozpuszczalności kompleksów immunologicznych,

zwiększenia rozpuszczalności kompleksów immunologicznych,

Aktywacja dopełniacza

Aktywacja dopełniacza

droga

droga

klasyc

klasyc

zna

zna

droga

droga

lektyno

lektyno

wa

wa

droga

droga

alternatyw

alternatyw

na

na

MAC (C5-C9) - kompleks

MAC (C5-C9) - kompleks

atakujący błonę komórkową

atakujący błonę komórkową

Liza komórki

Liza komórki

Najczęściej oznacza się następujące składniki dopełniacza:

C3, C4, inhibitor C1, czynnik B, czynnik P (properdyna).

CH100,CH50-całkowity poziom dopełniacza

Wykorzystuje się metody serologiczne z użyciem swoistych

przeciwciał: immunodyfuzja radialna,

ELISA

, RIA



obniżenie poziomu C3 - choroby autoimmunizacyjne

(toczeń rumieniowaty, kłębuszkowe zapalenie nerek),



niewielki spadek poziomu C3 - schorzenia wątroby

(przewlekłe zapalenie wątroby, marskość poalkoholowa),



wzrost poziomu C3 - ostre i przewlekłe zakażenia



niedobór C3 czynnika H, I- zakażenia paciorkowcami



C4 (wchodzi w skład konwertazy C5) – poziom obniżony w

toczniu rumieniowatym i wrodzonym obrzęku

naczyniowym



wrodzony brak inhibitora C1 - obrzęk naczynioruchowy

(Qyinckego-obrzęk kratani)



nabyty niedobór inhibitora C1- zaburzenia związane z

limfocytami B (przewlekłe białaczki, szpiczak mnogi)



niedobór C5,6,7,8,9,czynnika d,properdyny- zakażenia

dwoinką zapalenia opon mózgowych , Neisseria

Meningitidis)

2. Ocena zdolności granulocytów do

2. Ocena zdolności granulocytów do

fagocytozy

fagocytozy

(wrodzone neutropenie, cylkiczne neutropenie, zespół Chediaka-

(wrodzone neutropenie, cylkiczne neutropenie, zespół Chediaka-

Higashiego)

Higashiego)

Proces fagocytozy mierzymy wykorzystując zdolność komórek żernych

Proces fagocytozy mierzymy wykorzystując zdolność komórek żernych

do pochłaniania cząsteczek, do produkcji wolnych rodników czy

do pochłaniania cząsteczek, do produkcji wolnych rodników czy

migrację do czynników zapalnych

migrację do czynników zapalnych

20

2

+ NADPH

oksydaza NADPH

2O

-2

+NADP

+

+H

+

2O

-2

+ 2 H

+ dysmutaza ponadtlenkowa

H

2

O

2

+ O

2

H

2

O

2

+ Cl

-

mieloperoksydaza

HOCL + OH

-

a)

a)

Fagotest:

Fagotest:

(niedobory cząsteczek adhezyjnych)

(niedobory cząsteczek adhezyjnych)

Test

Test

wykonuje się z użyciem pełnej krwi pacjenta

wykonuje się z użyciem pełnej krwi pacjenta

oraz cząsteczek zymosanu (

oraz cząsteczek zymosanu (

Sacharomyces

Sacharomyces

cereviesie

cereviesie

) sprzężonych z fluorochromem (do

) sprzężonych z fluorochromem (do

fagotestu można też użyć

fagotestu można też użyć

bakterii wybarwionych

bakterii wybarwionych

fluorochromem)

fluorochromem)

100µ krwi

100µ krwi

+ 1mln cząsteczek zymosanu–

+ 1mln cząsteczek zymosanu–

Alexa Fluor

Alexa Fluor

inkubacja 1h ( 37

inkubacja 1h ( 37

0

0

C , 5%CO

C , 5%CO

2

2

)

)

odczyt w cytofluorometrze przepływowym

odczyt w cytofluorometrze przepływowym

Wynikiem analizy jest % komórek które pochłonęły

Wynikiem analizy jest % komórek które pochłonęły

zymosan

zymosan

b) Test redukcji cytochromu C - ocena

b) Test redukcji cytochromu C - ocena

produkcji wolnych rodników tlenowych

produkcji wolnych rodników tlenowych

(

(

przewlekła choroba ziarniniakowa-uszkodzenie

przewlekła choroba ziarniniakowa-uszkodzenie

oksydazy NADPH)

oksydazy NADPH)

Test oparty jest na redukcji cytochromu C przez rodniki

ponadtlenkowe(0

2-

) wytwarzane przez błonowy układ

oksydazy NADPH komórek fagocytujących w czasie

tzw. ”wybuchu tlenowego”

izolacja granulocytów

izolacja granulocytów

granulocyty + PMA +

granulocyty + PMA +

cytochrom C

cytochrom C

zmiana zabarwienia cytochromu c pod wpływem

zmiana zabarwienia cytochromu c pod wpływem

wolnych rodników

wolnych rodników

odczyt ekstynkcji w czytniku ELISA (550nm)

odczyt ekstynkcji w czytniku ELISA (550nm)

Typowy obraz płytki z wynikiem testu redukcji

Typowy obraz płytki z wynikiem testu redukcji

cytochromu c

cytochromu c

V. Mieszana hodowla limfocytów

V. Mieszana hodowla limfocytów

(MLC)

(MLC)



badanie wykonywane przy kwalifikowaniu do przeszczepu

badanie wykonywane przy kwalifikowaniu do przeszczepu

szpiku,

szpiku,

służy potwierdzeniu zgodności w układzie

służy potwierdzeniu zgodności w układzie

HLA klasy II

HLA klasy II

między

między

potencjalnym biorcą a dawcą

potencjalnym biorcą a dawcą



limfocyty mają zablokowaną zdolność do proliferacji

limfocyty mają zablokowaną zdolność do proliferacji

poprzez naświetlanie promieniowaniem jonizującym lub np.

poprzez naświetlanie promieniowaniem jonizującym lub np.

mitomycyną C

mitomycyną C



w mieszanej hodowli powyższe komórki pełnią rolę czynnika

w mieszanej hodowli powyższe komórki pełnią rolę czynnika

stymulującego proliferację limfocytów drugiej osoby

stymulującego proliferację limfocytów drugiej osoby



odpowiedź proliferacyjną ocenia się testem inkorporacji

odpowiedź proliferacyjną ocenia się testem inkorporacji

znakowanej trytem tymidyny

znakowanej trytem tymidyny

B - limfocyty biorcy

B - limfocyty biorcy

D - limfocyty dawcy

D - limfocyty dawcy

Bx - limfocyty biorcy naświetlone promieniowaniem jonizującym

Bx - limfocyty biorcy naświetlone promieniowaniem jonizującym

Dx - limfocyty dawcy naświetlone promieniowaniem jonizującym

Dx - limfocyty dawcy naświetlone promieniowaniem jonizującym

BBx, DDx – autostymulacje

BBx, DDx – autostymulacje

BDx, DBx – mieszane hodowle limfocytów

BDx, DBx – mieszane hodowle limfocytów

Wynikiem testu jest wartość indeksu stymulacji:

Wynikiem testu jest wartość indeksu stymulacji:

is BDx = (BDx – BBx)/BBx is DBx = (DBx – DDx)/DDx

is BDx = (BDx – BBx)/BBx is DBx = (DBx – DDx)/DDx

is BDx < 1 is DBx < 1 zgodność w układzie HLA

is BDx < 1 is DBx < 1 zgodność w układzie HLA

klasy II

klasy II

is BDx > 1

is BDx > 1

is DBx < 1

is DBx < 1

ryzyko odrzucenia

ryzyko odrzucenia

przeszczepu

przeszczepu

is BDx < 1

is BDx < 1

is DBx > 1 ryzyko choroby przeszczep

is DBx > 1 ryzyko choroby przeszczep

przeciw gospodarzowi

przeciw gospodarzowi

Test MLR w diagnostyce poronień

Test MLR w diagnostyce poronień

nawykowych

nawykowych

AAx

AAx

BBx

BBx

ABx

ABx

BAx

BAx

Surowica

Surowica

spulowana

spulowana

10 000 cpm

10 000 cpm

Surowica

Surowica

pacjentki

pacjentki

5 000 cpm

5 000 cpm

A-limfocyty pacjentki, Ax – napromieniowane limfocyty pacjentki
B- limfocyty jej partnera, Bx – napromieniowane limfocyty partnera

ABx (w surowicy spulowanej) – 100%
Jaki odsetek stanowi wartość ABx w wariancie z surowicą pacjentki?
Dla wartości z tabeli – 5000/10000 = 50%

Wartości prawidłowe ~40-70% wpływu hamującego surowicy
pacjentki

Przykładowe pytania:

Poniżej podano cztery wyniki testu mieszanej hodowli limfocytów (MLC).

Który z nich sugeruje zgodność w układzie HLA-D pomiędzy dawcą a

biorcą alloprzeszczepu:

a) indeks stymulacji (i.st.) BDx = 0,3 i.st. DBx = 0,1

a) indeks stymulacji (i.st.) BDx = 0,3 i.st. DBx = 0,1

b) i.st. BDx = 0,1 i.st. DBx = 1,1

c) i.st. BDx = 2,8 i.st. DBx = 0,6

d) i.st. BDx = 1,1 i.st. DBx = 1,0

B – odpowiadające komórki biorcy D - odpowiadające komórki dawcy

Bx – stymulujące komórki biorcy Dx – stymulujące komórki dawcy

U chorego występowały nawracające zakażenia bakteryjne. W związku

U chorego występowały nawracające zakażenia bakteryjne. W związku

z tym wykonano in vitro badania immunologiczne oceniające funkcje

z tym wykonano in vitro badania immunologiczne oceniające funkcje

komórek układu odpornościowego. Uzyskano następujące wyniki:

komórek układu odpornościowego. Uzyskano następujące wyniki:

A)

A)

proliferacja limfocytów aktywowanych fitochematoglutyniną

proliferacja limfocytów aktywowanych fitochematoglutyniną

(PHA) – 10700 cpm (norma = 17.310-46.152 cpm)

(PHA) – 10700 cpm (norma = 17.310-46.152 cpm)

B)

B)

proliferacja limfocytów aktywowanych zawiesiną bakterii

proliferacja limfocytów aktywowanych zawiesiną bakterii

Staphylococcus aureus(Cowan) – 500 cpm (norma = 696 - 4.226 cpm)

Staphylococcus aureus(Cowan) – 500 cpm (norma = 696 - 4.226 cpm)

C)

C)

synteza przeciwciał(PFC) – obniżona

synteza przeciwciał(PFC) – obniżona

D)

D)

test redukcji cytochromu C –8,05 nmoli tlenu/250 000

test redukcji cytochromu C –8,05 nmoli tlenu/250 000

komórek/30 min.

komórek/30 min.

(norma = 6,5-10,1 nmoli tlenu/250 000 komórek/30 min.)

(norma = 6,5-10,1 nmoli tlenu/250 000 komórek/30 min.)

Wyniki te sugerują:

Wyniki te sugerują:

a)

a)

upośledzenie funkcji limfocytów T

upośledzenie funkcji limfocytów T

b)

b)

upośledzenie funkcji limfocytów B

upośledzenie funkcji limfocytów B

c)

c)

upośledzenie funkcji limfocytów T i B

upośledzenie funkcji limfocytów T i B

d)

d)

upośledzenie funkcji granulocytów

upośledzenie funkcji granulocytów

e)

e)

nie występuje upośledzenie funkcji żadnej z badanych populacji

nie występuje upośledzenie funkcji żadnej z badanych populacji

komórek układu odpornościowego

komórek układu odpornościowego

Który z wymienionych testów można wykorzystać do oceny funkcji

Który z wymienionych testów można wykorzystać do oceny funkcji

komórek fagocytujących (granulocytów):

komórek fagocytujących (granulocytów):

a)

a)

test redukcji cytochromu C

test redukcji cytochromu C

b)

b)

test PFC (Plaque forming cells)

test PFC (Plaque forming cells)

c) test cytotoksyczny

c) test cytotoksyczny

Który z wymienionych testów można wykorzystać do oceny funkcji

Który z wymienionych testów można wykorzystać do oceny funkcji

limfocytów B:

limfocytów B:

a) Proliferacja limfocytów po stymulacji mitogenem PHA, OKT3

a) Proliferacja limfocytów po stymulacji mitogenem PHA, OKT3

b) Proliferacja limfocytów po stymulacji SAC, Elisa, PFC

b) Proliferacja limfocytów po stymulacji SAC, Elisa, PFC

c) Test PFC, MLR

c) Test PFC, MLR

d) Test redukcji cytochromu c, CH50

d) Test redukcji cytochromu c, CH50