Elektroforeza kapilarna

1

Arne Wilhelm Kaurin Tiselius

1902 - 1971

2

3

4

5

Determination of glutathione in orange

juice

Buffer

0.2 M TRIS, pH = 2.1

Sample

orange juice derivatized with

CMOT

diluted with acetonitrile (1:2),
vol. 12 % of capillary

Capillary

64.5 cm/56 cm, 50 m/150 m

Temp.

20C

Voltage

30 kV

Detection

355 nm

Glutathione
(GSH) content 45
nmol/ml

Roztwór

wejściow

y

Detektor

Roztwór

wyjściow

y

6

Schemat przyrządu do CE

7

Schemat aparatury do CE

Termostatowan

ie kapilary

H

V

Kasetka z

kapilarą

Podajnik próbek

(termostatowany)

DAD

System

uzupełniania

buforu

8

Rozdzielanie na drodze

elektroforezy oparte jest na

różnicy w szybkości migracji

cząsteczek w polu elektrycznym

9

Prędkość migracji

V

w kierunku

elektrod jest wielkością

charakterystyczną dla danej cząsteczki i

zależy od takich czynników jak:

• Natężenia pola elektrycznego E

V=

e

E



e

- ruchliwość elektroforetyczna

[cm

2

/Vs]

E - pole elektryczne
• Lepkości środowiska

V1/

10

• Ładunku cząsteczki q

Vq

• Rozmiaru cząsteczki (r-

promień cząsteczki)

V 1/r

11

+

-

--

-

++

+

N

N

-

+

Przepływ elektroosmotyczny

12

Przepływ elektroosmotyczny

13

Rozkład ładunku i potencjał Zeta

14

Rozkład ładunków w kapilarze

15

Ruchliwość elektroforetyczna

16

Rodzaj przepływu a kształt piku

Przepływ elektroosmotyczny

Przepływ laminarny

17

18

Dozowanie próbek do kapilary

19

Metody wprowadzania próbki

Hydrodynamiczna

20