Kierunek/specjalność/: BIB Nr grupy: 1	Imię i nazwisko: Paulina Zawada	Nazwisko prowadzącego: Dr Barbara Mickowska
Data wykonania ćwiczenia: 22.04.2015r.	Tytuł ćwiczenia: Elektroforeza kapilarna	Data oddania sprawozdania: 29.04.2015r.

1. Wstęp teoretyczny.

Techniki elektroforetyczne wykorzystują zjawisko migracji cząstek obdarzonych ładunkiem (jonów) w polu elektrycznym w kierunku elektrody o przeciwnym znaku. Metody elektroforetyczne umożliwiają zarówno jakościową jak i ilościową analizę próbek wieloskładnikowych. Elektroforeza kapilarna wykorzystywana jest ona do oznaczenia zawartości węglowodanów, kwasów nukleinowych, oligonukleotydów, aminokwasów, peptydów, protein, leków, witamin i jonów nieorganicznych. Szerokie zastosowanie tej techniki wynika z występowania jej licznych odmian różniących się pod względem procesu rozdziału oznaczanych substancji. Głównymi zaletami elektroforezy kapilarnej są: małe zużycie odczynników, małe objętości próbek oraz krótkie czasy analiz .Zastosowana w doświadczeniu micelarna chromatografia elektrokinetyczna (MEKC) wykorzystuje bufory z dodatkiem środków powierzchniowo czynnych. W odpowiednim stężeniu tworzą one micele, czyli kuliste cząstki o właściwościach charakteryzujących się występowaniem w ich cząsteczkach części hydrofilowej i hydrofobowej).

1. Cel ćwiczenia.

Oznaczanie wybranych witamin grupy B [w tym przypadku pirydoksyny] w preparacie multiwitaminowym. Analiza ilościowa metodą dodatku wzorca.

1. Wykonanie ćwiczenia.

Przygotowano 100 μl badanej próbki preparatu farmaceutycznego w 100 – krotnym rozcieńczeniu. Następnie sporządzono 4 roztwory wzorca pirydoksyny o różnym stężeniach (dodając kolejno 5, 10 i 15 ml wzorca) i umieszczono je w fiolkach do elektroforezy. Dokonano rozdziału elektroforetycznego i na podstawie zarejestrowanych pików odczytano ich pola powierzchni oraz czasy retencji.

Próbki	Pole powierzchni pod pikiem	Stężenie dodatku wzorca[mg/ml]
Badana próbka	0,00011228	x
I roztwór wzorcowy	0,00019018	0,04762
II roztwór wzorcowy	0,00027994	0,09091
III roztwór wzorcowy	0,00034158	0,13043

1. Wyniki.

Tabela 1. Otrzymane wyniki.

1. Obliczenia.

I roztwór wzorcowy z dodatkiem wzorca 5μl:

1 mg  − 1000 μl 

x mg   − 5 μl 

x = 0, 005 mg pirydoksyny

0, 005 mg − 0, 105 ml roztworu

x mg  − 1 ml roztworu

$$x = 0,04762\frac{\text{mg}}{\text{ml}}\ (stezenie)$$

II roztwór wzorcowy z dodatkiem wzorca 10μl:

1 mg  − 1000 μl 

x mg  − 10 μl 

x = 0, 001 mg pirydoksyny

0, 001 mg − 0, 110 ml roztworu 

x mg  − 1 ml roztworu 

$$x = 0,09091\frac{\text{mg}}{\text{ml}}\ (stezenie)$$

III roztwór wzorcowy z dodatkiem wzorca 15μl:

1 mg  − 1000 μl 

x mg  − 15 μl 

x = 0, 015 mg pirydoksyny

0, 015 mg − 0, 115 ml roztworu 

x mg  − 1 ml roztworu 

$$x = 0,13043\frac{\text{mg}}{\text{ml}}\ (stezenie)$$

1. Opracowanie wyników.

Wykres.1.Zależność pola powierzchni odpowiedniego piki do stężenia użytego standardu

y = 0, 0018x + 0, 0001

y = 0                     x = ?

$$x = \frac{0 - 0,0001}{0,0018}$$

x = −0, 056

x = |−0,056|

x = 0, 056 mg/ml

Po uwzględnieniu rozcieńczenia próbki:

0, 056mg/ml • 100 = 5, 6mg/ml

Błąd bezwzględny:

 x = |x−x_z|

x- wartość dokładna

x_z – wartość zamierzona

x = |4−5,6|

x = |−1,6|

x = 1, 6

Błąd względny:

$$\delta = \frac{x}{x} \bullet 100\%$$

$$\delta = \frac{1,6}{4} \bullet 100\%$$

δ = 40%

1. Wnioski.

Uzyskany przez nas wynik jest zawyżony-zawartość pirydoksyny wynosi 5,6 mg/ml, natomiast producent podaje , że w preparacie multiwitaminowym zawartość pirydoksyny wynosi 4 mg/ml. Błąd względny pomiaru wynosi 40%. Otrzymany wynik różni się, więc od informacji podanych na opakowaniu. Przyczyną może być niedokładność i nieprecyzyjność w przeprowadzaniu doświadczenia lub niedokładne przygotowanie mieszaniny.