HPLC

Cechy:

-wysoka sprawność

-dobra rozdzielczość

-szybkość

-zastosowanie wysokich ciśnień

Zasada HPLC- wysoka sprawność, dobra rozdzielczość, krótki czas analitu, stosowanie wysokich ciśnień

HPLC podstawa- oddziaływanie między próbką, fazą stac i ruchomą, że próbka jest ciekła

Optymalizacja metod HPLC- uszeregować elucja gradientowa, zmiana kolumny,elucja izokratyczna, zmiana rozpuszczalnika

Warunek HPLC- lotny rozpuszczalnik, który rozpuści próbkę

Analiza jakościowa w HPLC polega na- porównaniu czasu retencji piku subst z tr piku wzorca

Elucja izokratyczna- skład eluentu jest jednakowy przez cały czas analizy próbki

Elucja gradientowa- sklad eluentu zmienia się podczas analizy próbki

Eluent- faza ruchoma która wprowadza się do kolumny

Spektrofluorymetria

Przed oznaczeniem spektrofluometrycznym: dobrać optymalną dł. Fali promieniowania wzbudzającego i emitowanego, ustalić dozwolony zakres stężenia badanej subst

Światło w spektrofluorymetrii emituje- substancje

Spektrofotometria nie oznaczamy- struktury związku

Oznaczamy: zw fizjol czynne, Wit. B1, B2, hormony (Adr), aminokwasy (trypt, tyro), alkaloidy (chinina), sub farmaceutyczne (barbiturany, antybiotyki) spozywanie cukrów, węglowodanów, tłuszczów

Spektrofluorymetria zasada/ zależy od- adsorpcja i potem emisja

Spektrofluorymetria detektor można użyć do oznaczania polifenoli w herbacie

Spektrofluorymetria- kuwety kwarcowe

Spektrofluorymetria zasada- analiza fluorescencji próbki wywołanym światłem UV lub rentgenowskim

Detektor fluorescencji- najbardziej selektywny, specyficzny, czuły z detektorów HPLC

ASA

Przewodność elektrolitu zależy od- liczby jonów, ładunku, ruchliwości/ prędkości w polu elektr

Zasada ASA- absorpcja promieniowania elektromagnetycznego przez wolne atomy w st podstawowym

ASA oznaczamy- pierwiastki, metale, metaloidy w śladowych ilościach

ASA źródło promieniowania- lampa z katodą wnękową HCl i z wyładowaniem bezelektronowym EDL

Przesunięcie batochromowe- przesunięcie pasma w kierunku mniejszych częstości (dłuższych fal) wywołane oddziaływaniem podstawnika lub rozpuszczalnika

Przesunięcie hipsochromowe- przesunięcie pasma w kierunku większych częstotliwości- krótszych fal

Efekt hiperchromowy- zwiększenie intensywności pasma

Efekt hipochromowy- zmniejszenie intensywności pasma

Konduktometria- metoda analityczna, bada przewodnictwo elektryczne r-ru elektr, znajdujących się między dwoma elektrodami

Konduktometria bezpośrednia- pomiar przewodności właściwej elektrolitów- wyznaczanie stężenia r-rów na podstawie badania przewodnictwa- stosuje się detektorach konduktometrycznych stosowanych LC- procesach technolog, oczyszczanie wody, oznaczanie tlenu w wodzie

Konduktometria zastosowanie: miareczkowanie konduktometryczne, oznaczanie czystosci wody za pomoca przewodności wlasciwej, pomiar stalej dysocjacji slabego kwasu, pomiar przewodnictwa sluzy do oznaczania struktury r-rów elektrolitów

Walidacja- proces pozwalający zdefiniowań daną metodykę analityczną

Liniowość- możliwośc uzyskania wyników, które są proporcjonalne do stężenia

Dokładność- stopień zgodności między wynikiem pojedynczego pomiaru a wartością oczekiwaną/odniesienia

Powtarzalność- precyzja w warunkach powtarzalności, niezależne wyniki badania takich samych przedmiotów otrzymuje się tą samą metodą, w tym samy laboratorium, ten sam analityk i to samo wyposażenie, w krótkich odstępach czasu

Odtwarzalność- precyzja w warunkach odtwarzalności, wyniki badania takich samych przedmiotów otrzymuje się tą samą metodą, w różnych laboratoriach,, przez różnych operatorów, różne wyposażenie, w długich odstępach czasu

Precyzja- zbieżność wyników uzyskanych wielokrotnego pomiaru tej samej próby wykonanych wg określonej procedury

Identycznośc potwierdzamy- selektywność i specyficzność

Jon fragmentacyjny- utworzony wskutek utraty jednego lub kilku fragmentów z jonu macierzystego

Derywatyzacja- przeprowadzanie trudno lotnych związków w ich trwałe i lotne pochodne; podstawienie wodorów polarnych grupach np. OH, COOH, NH2 rodnikami organicznymi np. SiCH3

Nebulizacja- przeprowadzenie próbki w aerozol

Obszar daktyloskopowy- 1300- 700cm do -1; specyficzny dla danej cząsteczki, pasma powstałe w wyniku oddziaływania wzajemnego drgań

Czas retencji- czas potrzebny do przejścia subst przez kolumnę

Czas martwy- czas w którym wymywane są związki nie zatrzymywane na kolumnie

Metoda dodatku wzorca- dodanie do próbki znanych ilości sub oznaczanych, zwykle 5-150% oczekiwanej zawartości oznaczanej subst

Widmo- wykres zależności stężenia absorpcji od dł fali lub częstotliwości

Źródło promieniowania UV- VIS- lampy neutronowe, wolframowe, halogenowe, wysokociśnieniowe ksenonowe

Masa izotopowa- masa zsumowanych najpopularniejszych izotopów związków (masa najpopularniejszego w przyrodzie izotopu)

Masa molowa- masa wszystkich izotopów

Rozkład izotopowy- MS ma taką rozdzielczość, że widać poszczególne izotopy

Promieniowanie elektromagnetyczne- wzbudzenie elektronów zmiany energii oscylacyjnej, rotacyjnej cząsteczki

Oscylacja- ruch periodyczny, atomy na przemian oddalają/ przybliżają się do sub?

Odchylenia od prawa Lamberta- Beera nie spowoduje: dysocjacja wielu związków barwnych w r-rach, w których zastosowanie jonu jest inne niż zabarwienie cząsteczek niezdysocjowanych- rozpuszczalnik- zmiana zabarwienia ….. z upływem czasu- temp.- obeznośC obcych elektrolitów reagujących z odczynnikiem- ilość dodawanego odczynnika, jego natężenie, sposób i kolejność dodawania odczynników, czystość rozpuszczalników- niemonochromatyczność promieniowania

Charakterystyka jonizacji EI- jonizacja strumieniem elektronów, twarda metoda jonizacji, odbywa się w próżni i powoduje fragmentację badanych czastek, najbardziej popularna metoda w chromatografii gazowej

Rodzaje drgań:

1.rozciagajace/ walencyjne- symetryczne i antysymetryczne

2.deformacyjne- nożycowe i kołyszące w paszczyźnie, wahadłowe i skręcające poza płaszczyzną

3.szkieletowe

Analizator KWADRUPOLOWY

-najbardziej popularny, tani

-ograniczona rozdzielczość

-przeciwległe pręty są parami polaryzowane w fazie

-potencjał prądu stałego DC przyłożony do prętów i modulowany częstością RF

-tylko jony o specyficznej wartości m/z przechodzą przez detektor

-w trakcie skanowanie widma

-zmienia się DC i RT

ETAPY ANALIZY MS

1. generowanie cząsteczek w fazie gazowej próbki (ciecz, roztwór, ciało stałe itd.)

2. jonizacja tych cząsteczek

3. rozdzielenie na podstawie ich masy

4. detekcja strumienia jonów

Gaszenie stężeniowe – w roztworach rozcieńczonych intensywność fluorescencji jest liniową funkcją stężenia luminoforu. Gdy stężenie substancji oznaczanej osiągnie pewną granicę to intensywność promieniowania fluorescencji zaczyna maleć.

Najczęściej stosowana technika jonizacji LC-MS- ESI

Najczęściej stosowany detektor w GC- FID płomieniowo - jonizacyjny

Roznąca siła elucji rozpuszczalników RP- woda, metanol, acetony, heksan

Siła elucji w ukl faz normalnym: n pentan< n heksan< cykloheksan< tetra chlorek wegla< toluen< benzen< eter di etylowy< chloroform< dichlorometan< dichloroetan< aceton< octan etylu< acetonitryl< pirydynol< etanol< metanol< woda< kw octowy

Który z gazów nośnikowych jest stosowany w GC- H2, N2, Ar, He

Molowy współczynnik absorpcji nie zależy od: stężenie, grubość warstwy, natężenie, promieniowanie padające; jest wielkością stałą

zależy od: długość fali padającego światła, rodzaju sub absorbującej, temp.

Wraz z rozcieńczeniem przewodnośc molowa rośnie, właściwa- maleje

LC-MS- pomiar m/2

DSC oznaczamy- czystość , polimorfizm, interakcje (lek- sub pomocnicza)

Temp. Topnienia, krystalizacji, parowania, sublimacji, temp. Przemian szklistych, ciepła właściwego, kinetyki, denaturacji

ATR- IR- całkowite wewnętrzne odbicie

Zakres właściwy IR- podczerwień - 780nm- 1mm; brak możliwości separacji mieszanin składników

Splitis GC- dozownik umożliwia spadek ładunku

Split/splitles- dozownik z dzieleniem/ bez strumienia gazu

Przesuniecie pasma obsorbcji zależy- auksochromy i pH?

Ekstrakcja do fazy stałej SPE- wstępne oczyszczanie i zatężenia zw. Chem?

Detektor elektrochemiczny- faza ciekła przewodzi prąd i sub mogą ulegać reakcji ox-red

Przepływ w kolumnie powoduje- pompy tłokowe i strzykawka

Stałe postacie leków- przyczyny błedów- barwniki

Płynne- barwniki, konserwanty, antyoksydanty

W odwróconym ukł faz największą siłe elucujną ma- acetonitryl

Nieprawidłowy tok postępowania- używanie zlewki jako naczynia miarowego

ETAAS wynik w postaci- piku

Molowy współczynnik absorpcji

-jest wielkością stałą, nie zależy od stężenia,

grubości warstwy absorbującej i natężenia

promieniowania padającego.

Zależy od długości fali światła padającego i

rodzaju substancji absorbującej światło,

w mniejszym stopniu od temperatury.

Czas martwy t_M (czas retencji substancji niezatrzymywanej) –

czas liczony od momentu wprowadzenia do kolumny (od początku analizy) substancji niezatrzymywanej przez fazę stacjonarną do momentu pojawienia się na chromatogramie

maksimum piku

Czas retencji t_R (całkowity czas retencji) - czas liczony od momentu wprowadzenia badanej substancji do kolumny (od początku analizy) do momentu pojawienia się na

chromatogramie maksimum piku

Czas retencji zredukowany t'_R - różnica pomiędzy całkowitym czasem retencji badanej substancji i czasem retencji substancji niezatrzymywanej: t'_R = t_R - t_M

Współczynnik retencji k - miara czasu, w jakim substancja

przebywa w fazie stacjonarnej, w stosunku do czasu, w którym przebywa ona w fazie ruchomej; określa, ile razy dłużej substancja jest zatrzymywana przez fazę stacjonarną niż potrzebowałaby na przejście przez kolumnę z szybkością fazy ruchowej: k = t'_R/t_M

Przewodnośc elektrolitu zależy od:

-liczby jonów, ładunku, ruchliwości w polu elektrycznym

Odchylenia od prawa Lamberta-beera:

-dysocjacja wielu zw barwnych

-temp

-pH

-rozpuszczalnik

-zmiana zabarwienia z uplywem czasu

-niemonochromat prom

-ilosc, czyst, kolejnosc dod ropuszczal

-obecnosc obcych elektr

G:det uni masowyMSDkatarometr ciep-przew

odnosTCDchrom-syg/t k=s/r integra MSstruktorg

UV/VIS czast wid polo i natęż abso-pochlan

opt-mono Prób:spec sel Beer czysty ilościowe

identy,czyst,strukt czast, Sel-inne zakloc spec-tylko

to co zamierz czu;przyr nat sy/przy stęż sub.

HPLC- w. spr,d. rozdzi.krótki t analitu, wys. Ciś.

analMAS;zakr,rozdz-mozli rozroz na wid.

Pików o zbli mas. Przep,czul Typy:sel magnet,

2xognisko,cykloforn jon DSc emisja lub pochl

DMA pom cech lepko K rozn-m cieplo probki

Flux bezwl ciepl,dlugi pomiar,mierzy T a nie sił.

sr dokład Spektrofluorym k kwar

D. flure naj sel spec, czuły z d HPLC

Prec- zbież wyn. uzyskanych wielokroć.

pomiaru tej samej p. wykon.wg określ proc

Wid- Cm absorpcji/dł f. lub częst.1.rozciagajace/

walencyjne- symetryczne i antysymetryczne2.

deformacyjne- nożycowe i kołyszące w paszczyźnie,

wahadłowe i skręcające poza płaszczyzną3.szkieletowe

IR transmi i reflek

n pentan< n heksan< cykloheksan< tetra chlorek wegla< toluen< benzen< eter dietylowy< chloroform< dichlorometan< dichloroetan< aceton< octan etylu< acetonitryl< pirydynol< etanol< metanol< woda< kw octowy Raman nieorg jakość zrod,prob,mono,det wzm rej komp kwarc

ozn. WODY:

konduktometria,IR, NMR

,analiza termiczna

OZN. Składników mineralnych

UV-VIS, AAS, AES,potencjometria

OZN. BIAŁKA, AMINOKWASÓW

UV-VIS,turbidymetria, IR, NMR

Chromatografia(jonowymienna

,powinowactwa,żelowa)

Elektroforeza, dializa

OZN. TŁUSZCZY

IR, NMR, UV, VIS

GC,chr. Cienkowarstwowa,HPLC

Ozn. WĘGLOWODANÓW:

TLC, GC, HPLC,

MS, NMR, IR

Polarymetria, refraktometria

Przewodnosc molowa nie maleje ze spadkiem stezenia

a przewodnosc wlasciwa maleje ( wraz z rozcienczeniem)