Laboratorium z biochemii

„Wyznaczanie zakresu wprost proporcjonalnego przyrostu trojfenyloformazanu (TF) podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC”

Data ćwiczenia: 01.12.2015

Skład sekcji:

Marta CZEKAJ

Agata CZEMERAJDA

Weronika SERAFIMOWICZ

Natalia POTRZEBOWSKA

I WYKONANIE DOŚWIADCZENIA

• Otrzymano 12 probówek wirówkowych o pojemności 10 ml.

• Do każdego zestawu reagentów przeznaczone były po dwie probówki.

• Następnie wprowadzono do nich następujące objętości reagentów:

• 7 ml osadu czynnego

• 1 ml roztworu Na₂SO₃

• Na koniec dodano po 1 ml roztworu TTC w odstępach co 10 minut do każdej pary probówek.

• Po wprowadzeniu reagentów zawartość probówek wymieszano i inkubowano w ciemności w temeraturze pokojowej przez okres 10, 20, 30, 40 i 50 minut.

• Czas mierzono od momentu połączenia roztworu TTC z osadem.

• Po upływie ustalonego czasu probówki szybko odwirowano – czas wirowania to ok. 2 minuty.

• Odrzucono ciecz nadosadową (supernatant)

• Do każdej z probówek wprowadzono 7ml alkoholu metylowego w takiej samej kolejności jak przy wprowadzaniu TTC.

• Próbki energicznie wytrząsano i ponownie odwirowano.

• Następnie oznaczano ekstynkcję supernatantu przy długości fali 485 nm.

II WYNIKI

Zmierzone wartości ekstynkcji:

Czas [min]	10	20	30	40	50
A(1)	0,183	0,235	0,329	0,345	0,452
A(2)	0,157	0,238	0,301	0,365	0,475
Średnia ekstynkcja	0,170	0,237	0,315	0,355	0,464

Gdzie:

A(1) – ekstynkcja dla pierwszego roztworu o danym składzie reagentów

A(2) - ekstynkcja dla roztworu z drugiej probówki o analogicznym składzie reagentów

III WNIOSKI

Na podstawie uzyskanych wyników udało się wyznaczyć zakres wprost proporcjonalnego przyrostu trójfenyloformazanu podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC. Czynnikiem warunkującym prawidłowe przeprowadzenie testu jest odpowiedni czas inkubacji próbek, który w naszym przypadku wynosił między 10 – 50 minut. Przyrost ilości TF jest względnie liniowy w całym badanym okresie czasu, jednak najbliższy prostej przebieg można zaobserwować między 10 a 30 minutami inkubacji. Aby wyniki były bardziej wiarygodne należałoby przeprowadzić większą ilość pomiarów.