Dominika Nynek

W-7 Ochrona Środowiska

Nr albumu: 186490

MIKROBIOLOGIA

SPRAWOZDANIE z ćw. nr 1 i 2

Morfologia komórki i kolonii. Barwienie pozytywne proste i barwienie negatywne. Barwienie złożone

1. Cel ćwiczenia.

Obserwacja mikroskopowa kształtów komórek bakteryjnych i ich kolonii. Zapoznanie się z podstawowymi typami morfologicznymi bakterii i kolonii, celem i rodzajami barwienia oraz sposobami wykonywania preparatów.

1. Cześć doświadczalna

   1. Morfologia komórki – wykonanie barwienia prostego błękitem metylenowym – zadanie 1

Dla szczepów Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Sarcina lutea przeprowadzono barwienie proste. W zastosowanej metodzie określanej jako pozytywna wymagane było użycie barwnika zasadowego – błękitu metylowego. Także potrzebne było wcześniejsze utrwalenie komórek- w tym wypadku było to utrwalenie termiczne, w efekcie następuję śmierć tych komórek, dzięki czemu osłony stają się przepuszczalne dla barwnika. Sporządzone preparaty obserwowano przy powiększeniu 100x, zaś rysunki wykonane na tej podstawie zamieszczono po niżej.

1. Wyniki

Rysunek 1. Pseudomonas fluorescens

Rysunek 2. Sarcina lutea

Rysunek 3. Escherichia coli

1. Morfologia komórki – wykonanie barwienia negatywnego - zadanie 2

Przy zastosowaniu metody klasyfikowanej jako negatywna wykonano barwienie proste dla wybranego szczepu bakterii Arthrobacter i Bacillus cereus. W tym celu użyto nigrozyny, kwaśnej substancji o ładunku ujemnym, barwiącej tło zamiast obiektu. Umożliwia to zaobserwowanie bakterii nie przyjmujących barwników. W tym ćwiczeniu w sporządzanych preparatach naniesione mikroorganizmy zachowuje się przy życiu. Obserwacje bakterii przeprowadzono pod obiektywem o powiększeniu 100x, natomiast wyniki zamieszczono po niżej, na rysunkach 1- 3.

1. Wyniki

Rysunek 1. Arthrobacter sp.

Rysunek 2. Bacillus cereus

1. Morfologia kolonii - zadanie 4

Wybrano dwie kolonie spośród wcześniej posianych i wyrosłych na szalce Petriego z pożywką agarową. Następnie przeprowadzono obserwacje a ich wyniki zamieszczono poniżej.

1. Wyniki

Rysunek 1. Kolonia Escherichia coli

Rysunek 2. Kolonia Arthrobacter sp.

1. Wnioski

Podczas pracy przy mikroskopie jedną z obserwowanych bakterii o kształcie cylindrycznym były Pseudomonas fluorescens, o formie właściwej dla rodzaju Pseudomonas - pałeczki. Zauważono że w preparacie tworzyły zgrupowanie palisadowe.

Zaś przy obserwacji bakterii dawniej określanej jako Sarcina lutea obecnie -Micrococcus luteus zauważono ziarniaki tworzące wspólną formę złożoną z wielu komórek zgrupowanych w grona, dwoinki, pakiety i tetrady. Jednak najbardziej charakterystyczne są dla tego mikroorganizmu ułożenia w pakiety zgodnie z łacińską nazwą rodzajową Sarcina. Takie różne ułożenia mogą wynikać z różnego stopnia rozwoju i wieku komórek.

Kolejna obserwowana bakteria to Escherichia coli podobnie jak Pseudomonas fluorescens to pałeczka. Widoczne były ułożenia wyglądające jak palisadowe, a także krótkie łańcuszki.

Bakteria z rodzaju Arthrobacter przygotowana do obserwacji przy barwieniu negatywnym to pleomorficzna bakteria. Zależnie od warunków przyjmuje postać ziarniaków lub pałeczek. Podczas badań pod mikroskopem zauważano pałeczki o maczugowatym wyglądzie tworzące połączenia w formie rozgałęzień. Zatem jest to młoda kolonia bytująca w warunkach dużej ilości pokarmu.

Z kolej następna bakteria obserwowana przy barwieniu negatywnym - Bacillus cereus to zgodnie z nadaną łacińską nazwą Bacillus laseczka tworząca połączenia dwóch lub więcej komórek w łańcuchy.

Przy obserwacji kolonii Escherichia coli sierdzono, że kształt kolonii jest okrągły, brzeg równy, wzniesienie wypukłe, barwa jasno – beżowa, kolonia półprzejrzysta a powierzchnia szorstka.

Natomiast kolonia bakterii glebowych z rodzaju Arthrobacter ma kształt okrągły, brzeg równy, wzniesienie wypukłe, barwę pomarańczową, powierzchnię gładką i była nieprzejrzysta.

1. Cel ćwiczenia.

Obserwacja mikroskopowa metodą złożoną morfologii komórek bakteryjnych. Poznanie sposobu barwienia Grama i różnic pomiędzy bakteriami gramdodatnimi a gramujemnymi.

1. Cześć doświadczalna

4.2 Wykonanie barwienia metodą Grama – zadanie 1

Wykonano barwienie Grama dla wybranych szczepów bakterii Bacillus cereus i Pseudomonas fluorescens. W tej metodzie klasyfikowanej jako pozytywna wykorzystywane są dwa barwniki fiolet krystaliczny i fuksyna zasadowa. Fiolet krystaliczny zatrzymywany jest przez ścianę komórkową o specyficznej budowie. Przygotowywane preparaty badano przy powiększeniu 100x pod mikroskopem a gotowe rysunki z obserwacji zamieszono po niżej.

4.3 Wyniki

Rysunek 1. Pseudomonas fluorescens

Rysunek 2. Bacillus cereus

4.4 Wnioski

Przy obserwacji bakterii Pseudomonas fluorescens zauważono pałeczki o czerwonym kolorze zatem są to gramujemne pałeczki. Gramujemne czyli o cienkiej warstwie mureiny - peptydoglikanu z dodatkową zewnętrzna warstwą przed ścianą komórkową – błoną zewnętrzna.

Zaś Bacillus cereus to gramdodatnia laseczka pomimo, że stwierdzono w niektórych przypadkach barwę, oprócz właściwej – fioletowej dla gramdodatnich bakterii Bacillus , czerwoną – przyczyną takiego stanu mogło być złe przygotowanie preparatu i całkowite wyniszczenie części znajdujących się na szkiełku komórek, bądź była to stara hodowla. Laseczki układały się w łańcuszki o różnej ilości tworzących ich komórek – od dwóch do czterech.