inhibitory - substancje hamujące aktywność enzymów

cystatyny hamuja proteazy cysteinowe=centrum aktywnym cysteina

searyny

aspiny

badanie mechanizmów

projektowanie leków

kontrorla rozwoju i wzrostu

selektywne hamoanie enzymów patogennych (np insekcycydy)

nieodwracalna (np sarin hamuje serynę w centrum aktywnym

odwracala

współzawodnicza

niewspółzawodnicza

awspółzawodnicza

im większe powinowactwo tym lepszy inhibitor

stała dysocjaji kompleksu enzym inhibitor określa siłę

[E]+Ida ↔ EI więc Ki=[E I]/[EI]

Mierząc obniżenie się szybkości początkowej reakcji w miarę wzrostu stężenia inhibitora można wyznaczyć Ki

inhibicja kompetycyjna inhibitor wiąże się do miejsca wiązania substratu (lub w pobliżu) blokując je. inh musi mieć stróktórę podboną do substratu lub analogiem stanu przejściowego

inhibitor kompetencyjny „redukuje” stężenie aktywnych cząstek enzymu. Pozostałe cząsteki mogą tak samo aktywnie katalizować. Inhibitor współzawodniczy obniża powinowasctwo enzymu do substratu (wzrost KM app (ang pozorny/widoczny)

KMapp=KM[(1+([I]/Ki)

ale nie zmienia Vmax

im większe stężenie inhibitora tym mniejsza szybkość początkowa

Szybkość maksymamalna reakcji jest niezmieniona ale w obceności inhibitora dużo większe stezenie subtratru jest potrzebne do osiągniecia danego ułamka Vmax

(inhibitor pionizuje krzywią na wyrkesie 1/v od 1/s)

stopień inhibicji zależy od

stęzenia substratu wzrost stęż → zwiększa się stopień inhibicji

od stezenia inhibitora

wartości Km

wartości Ki - nie jest równoważna stężeniu hihibitora które powoduje 50% inhibicji

Ki dla inhibitra współzawodniczącego

y - KMapp

x - [I]

przecięcei krzywej po ujemnej stronie [I]

inhibicja niekompetyncyjna

kompetyszyn ang (współzawodnictwo)

wiąże się nie w pobliżu centrum anktywnego

zwiększenie stężnia substratu nie zmienia stopnia inhibicji bo ligandy nie współzawodiczą o to samo miejsce wiązania

nie zmienia Km natomiast obniża Vmax

na wykresie 1/V od 1/[s] - krzywa się płaszczy ale przyczepiona w punkcjie przecięcia z 1/[s]

inhibitor obniża siteznie funkcjonalenego enzymu reszta enzmu zachowuje się jak bardziej rozcięczon roztwór

Vmax app = Vmax/1+([I] /Ki)

inhibicja akompetycyjna (ang ankopetitiw)

wiąże się do kompleksu enzym subtrat a nie do wolnego enzymu

na wykresie 1/v od 1/Vs proste równoległe obniża się się Vmax i Kmapp

zwiększa się powinowactwo enzymu do subtstrtu

więcej substratu wiąże się do enzymu ale zostają w kompleksie ESI

inhibicja mieszana

syntaza tymidalinowa dostarcza tymidylanu

jego potencjalne inhibitory: zmieniony substrat lub zmieniony…hydrofolian

proste nie przecinają się na 1/v od 1/[s] na osi x ani na y

inhibitory cześciowe

aktywność enzymu nie można sprowadzić do zera nawet stosjąc makymalne stężenia inhibitora

IC50

stężenie inhb wymagaane do siągniecia połowy całkowitej inhibicji

z sigmoidalnego wykresu można odczytać stężenie substancji potrzebne do wywołania 50% maksymalnej zmiany monitorowaneog sygnału

wykres vi /V od [I]

do badania wiązania inhibitora z receptorami

sledzenia procesów komórkowych

stężenia w szerokim zakresie (7 rzędwo wielkości 10-3 10-2 … 10⁴

IC 50 dla określonego inhibitora może zmieniać się zależnie od stężenia substratu

pomiar należy prowadzić w takim samym stężeniu substratu

IC50 do obliczania Ki

dla kompetycyjnych Ki= IC50/ (1/[S] / Km)

dla niekompetycyjnych Ki=IC50 przy założeniu żę alfa = 1 (nieważna co to alfa)

dla akompetycyjnych Ki=IC50 /(1+Km/[S]) gdy [S] >> Km wtedy Ki~IC50

ułatwia gdy mierzy się względną siłę hamowania zw podobnch strukturalnie do jednej cząsteczki macierzystej

inhibitory nieodwracalne - kowalencyjnie wiążą się z enzymem pozwala na badani grup funkcyjnych istotnych dla katlizy

---