Pałeczki niefermentujące, Diagnostyka pałeczek Gram-ujemnych niefermentujących glukozy


Pałeczek Gram-ujemne niefermentujące glukozy.

Pałeczki niefermentujące glukozy są to pałeczki tlenowe, nie wytwarzające przetrwalników, które charakteryzuje brak zdolności fermentacji glukozy, tzn. rozkładania glukozy bez udziału tlenu.

Klasyfikacja pałeczek Gram-ujemnych niefermentujących (wybrane rodzaje)

Rodzina: Pseudomonadaceae - pałeczki ruchome - rzęski biegunowe
Rodzaj: Pseudomonas Gatunek: P. aeruginosa

P. fluorescens

P. putida

P. stutzeri

P. mendocina

P. alcaligenes

Rodzaj: Burkholderia Gatunek: B. mallei

B. pseudomallei

B. cepacia

B. picketti

B. gladioli

Rodzaj: Comamonas Gatunek: C. acidovorans

C. terrigena

C. testosteroni

Rodzaj: Brevundimonas Gatunek: B. diminuta

B. vesicularis

Rodzaj: Stenotrophomonas Gatunek: S. maltophilia

Rodzaj: Sphingomonas Gatunek: S. paucimobilis

S. parapaucimobilis

S. yanoikuyae

S. adhesiva

S. capsulata

Rodzina: Methylococcaceae Rodzaj: Methylobacterium Rodzaj: Roseomonas

Rodzaj: Balneatrix

Rodzina: Alcaligenaceae - pałeczki ruchome - wkołorzese

Rodzaj: Alcaligenes Gatunek: A. faecalis

A. piechaudii

A. xylosoxidans spp. xylosoxidans

A. xylosoxidans spp. denitrificans

Rodzaj: Bordetella

Rodzina: Rhizobiaceae - pałeczki ruchome - wkołorzese

Rodzaj: Achromobacter Rodzaj: Agrobacterium Rodzaj: Ochrobactrum Rodzaj: Oligella

Rodzina: Cytophagaceae — pałeczki nieruchome oksydazo-dodatnie
Rodzaj: Flavobacterium Gatunek: F. breve

F. gleum

F. indologenes

F. meningosepticum

F. odoratum

Rodzaj: Sphingobacterium

Rodzaj: Weeksella Gatunek: W. virosa

W. zoohelcum

Rodzaj: Moraxella Gatunek: M. lacunata

M. nonliąuefaciens M. osloensis M. phenylpryuvica M. atlantae

Pałeczki nieruchome — oksydazo-ujemne

Rodzaj: Acinetobactęr Gatunek: A. calcoaceticus

A. baumannii

A. haemolyticus

A. lwoffii

A. junii

A. johnsonii

Pałeczki te są obecnie częstą przyczyną zakażeń szpitalnych pacjentów z chorobami zagrażającymi życiu i z obniżoną odpornością organizmu. Wywołują one:

Miejscem ich naturalnego występowania jest woda. gleba, ścieki i żywność. Mogą rozwijać się w ubogich w składniki odżywcze środowiskach. Stanowią również składnik mikroflory skóry (pachy, pachwiny, przestrzenie międzypalcowe) i są często przenoszone na rękach pacjentów i personelu szpitalnego (Acinetobactęr!).

Charakteryzują się wieloraką opornością na antybiotyki. Niektóre (np. Acir.etobacier) są oporne na wszystkie betalaktamy z grupy penicylin, inne (np. Stenotrophomonas maltophilia) na imipenem lub (Burkholderia cepacia) na gentamycynę.

Identyfikacja

Uwzględnia się takie cechy biochemiczne jak:

W praktyce wykorzystuje się gotowe zestawy umożliwiające identyfikację do gatunku np. API 20NE, ID 32 GN w ramach systemu ATB Expression firmy bioMerieux.

1. Pseudomonas aeruginosa

Pałeczka ropy błękitnej, tlenowa, szeroko rozpowszechniona w przyrodzie (gleba, woda, ścieki, rośliny, owady, zwierzęta), chorobotwórcza dla roślin, owadów i zwierząt.

Zakażenia przez nią wywoływane najczęściej rozpoczynają się w miejscach wilgotnych np.

Wytwarza barwniki fenazynowe, rozpuszczalne w wodzie i dyfimdujące do podłoża:

Szczepy szpitalne Pseudomonas aeruginosa mogą nie wytwarzać barwników!

Czynniki, które decydują o chorobotwórczości Pseudomonas aeruginosa:

Rutynowa diagnostyka Pseudomonas aeruginosa

    1. posiew materiału na:

podłoże wybiórcze z cetrymidem (bromek cetylotrójmetyloamonowy 0.02% i kwas nalidyksowy 15 mg/l jako czynniki selektywne) np. Agar Pyocyanosel bioMerieux (może służyć do bezpośredniego posiewu kału, ropy lub moczu; zalecany do wykrywania P. aeruginosa w żywności i wodzie; używany zarówno w badaniach systematycznych w warunkach szpitalnych jak i w przemyśle - skażenie powierzchni, aparatury, przyrządów, środków antyseptycznych itd.) - obserwacja wytworzenia piocyjaniny i fluoresceiny (w świetle lampy UV) po inkubacji 24-48 godzinnej w temp. 35°C

podłoże King B z nitrofurantoiną (zahamowanie rozwoju większości pałeczek Gram-ujemnych) - po 24 godzinnej inkubacji w temp. 35-37°C obserwacja w świetle lampy UV zielonej, niebieskiej lub zielono-żółtej fluorescencji. Pseudomonas aeruginosa wzrasta również na zwykłym podłożu agarowym i agarowym z dodatkiem 5% krwi baraniej, tworząc duże, szaro-brązowo-żółte kolonie (Morfologia kolonii: S-gładka, R-szorstka, M-śluzowa). Otoczenie kolonii zazwyczaj wybarwione jest na kolor żółtozielony lub zielononiebieski. Zapach: miodu lub jaśminu (trimetyloamina).

    1. preparat barwiony metodą Grania - pałeczka Gram-ujemna wzrost w temp. 42°C w podłożu bulionowym

    2. wykrywanie piocyjaniny w podłożu płynnym - warstwa chloroformu dodanego do 24h hodowli bulionowej zabarwia się na kolor zieloniebieski; na. powierzchni hodowli błonka

    3. wykrywanie ruchu (urzęsienie biegunowe) w półpłynnym podłożu z dodatkiem TTC (chlorek trójfenylotetrazoliwy) - wzrost i zaczerwienienie w górnej części podłoża i wzdłuż linii wkłucia (parasol)

    4. wykrywanie oksydazy cytochromowej - odczynnik tetrametylo-p-fenylodiamina reaguje z cytochromem c wytwarzając składnik koloru niebieskiego