CCF20081011001

Wykonanie', do identyfikacji białka w badanej próbce kwasu nukleinowego można

"2 _# -2

wykorzystać próbę biuretową opisaną w ćwiczeniach nr 2 (1 cm próbki badanej + 2 cm 10% NaOH + 2-3 krople 1% roztworu CuSC>4 ).

2)    Wykrywanie pentoz.

a)    Próba Tollensa (z floroglucyną)

Wykonanie: do 2 probówek pobrać otrzymane DNA i RNA, dodać po lcm³ stężonego HC1 i po 1 cm³ floroglucyny i ogrzewać we wrzącej łaźni wodnej. W obu przypadkach powstaje czerwony produkt kondensacji.

b)    Próba Biała

Wykonanie: do 2 probówek pobrać otrzymane DNA i RNA, dodać 2 cm³ 0,2% roztworu orcyny w 20% roztworze HC1 i dodać kroplę 1% roztworu FeCb- Ogrzewać we wrzącej łaźni wodnej 5-10 minut. W obecności pentoz tworzy się barwa zielona.

3)    Odróżnienie DNA od RNA - reakcja Dischego.

Wykonanie: do probówek z DNA i RNA dodać po 3 cm^J 0,4% NaOH i dokładnie rozgnieść bagietką (szczególnie DNA), przesączyć. Do 1 ml przesączu wprowadzić 2 cm^J odczynnika dwufenyloaminy. Zawartość probówek ogrzewać przez 10 minut we wrzącej łaźni wodnej. W przypadku DNA powstaje barwa niebieska, w przypadku RNA reakcja jest negatywna.

4)    Reakcje na zasady purynowe.

Wynik dodatni dają tylko wolne zasady purynowe dlatego najpierw należy przeprowadzić hydrolizę otrzymanych kwasów nukleinowych. W próbie z AgN03 czynnikiem hydrolizującym łańcuchy DNA i RNA jest 5% H2SO4, zaś w reakcji mureksydowej stężony HN0₃.

a)    Próba z AgN03

Wykonanie: do probówek z DNA i RNA dodać po 5 cnT 5% H2SO4 i ogrzewać 30 minut na wrzącej łaźni wodnej. Zobojętnić stężonym amoniakiem wobec czerwieni metylowej i odsączyć przez bibułę do innej probówki. Do przesączu dodać kilka kropli 10% AgNC>3. Tworzy się biały osad kompleksu puryn ze srebrem.

b)    Próba mureksydowa

Wykonanie: DNA i RNA umieścić w parowniczkach, zadać kilkoma kroplami stężonego HNO3 i odparować do sucha. Pozostałość zwilżyć kilkoma kroplami amoniaku w obecności zasad purynowych pojawia się czerwone zabarwienie purpuranu amonu (mureksydu).

5)    Wykrywanie kwasu ortofosforowego.

Dla wykazania obecności kwasu ortofosforowego w cząsteczkach nukleotydów tworzących DNA i RNA niezbędnym jest przeprowadzenie uprzedniej hydrolizy tych makrocząsteczek. W proponowanym doświadczeniu czynnikiem hydrolizującym jest 0,5 M roztwór HC1.

Wykonanie: do probówek z DNA i RNA dodać po 0,3 cm³ 0,5 M HC1 i po przykryciu probówek korkami szklanymi ogrzewać we wrzącej łaźni wodnej przez 15 minut. Po oziębieniu dodać 1 cm³ odczynnika molibdenowego i 1 cm³ reduktora. Probówki wstawić na chwilę do wrzącej łaźni wodnej. Obserwować tworzenie się niebieskiego kompleksu fosforowo-molibdenowego.

4