CCF20121201010

-67-

Wykonanie oznaczenia:

Odczynniki: bufor cytrynianowo-fosforanowy o pH 6,5 1 % roztwór skrobi w 0,9% NaCl 0,02 mol/1 J₂w KJ ślina

Do probówki wlać 1 ml śliny (nie sączonej), a następnie dodać 4 ml bufom cytrynianowo-fosforanowego i wymieszać. Uzyskuje się w ten sposób 5-cio krotne rozcieńczenie śliny.

W statywie przygotować 10 probówek, do pierwszej wlać 4 ml przygotowanej mieszaniny (ślina z buforem) a do następnych po 2 ml buforu cytrynianowo-fosforanowego. Z probówki pierwszej pobrać 2 ml mieszaniny i przenieść do probówki drugiej (wymieszać!). Z drugiej probówki pobrać 2 ml i przenieść do probówki trzeciej i wymieszać! itd. Z probówki dziesiątej odrzucić 2 ml roztworu.

Uzyskuje się w ten sposób następujące rozcieńczenia śliny probówkach:

1:5; 1: 10; 1:20; 1 : 40; 1 : 80; 1: 160 itd.

Odpowiadają one następującym ilościom śliny w probówkach: 0,4 ; 0,2; 0,1; 0,05; 0,025; 0,012 ml itd.

Wszystkie probówki wstawić do łaźni wodnej o temperaturze 38°C na 5 minut, po czym do każdej probówki dodać po 2 ml 1 % roztworu skrobi w 0,9% NaCl. Zawartość probówek bardzo dokładnie wymieszać!!!!, i wstawić do łaźni wodnej (38°C) na okres 30 minut. Po upływie tego czasy do każdej probówki wlać po 3 krople J₂w KJ.( zacząć dodawać od probówki w której ślina jest najbardziej rozcieńczona).

Zaobserwować w której probówce reakcja z jodem jest ujemna (stadium dekstryn nie dających zabarwienia za^- jodem)

Obliczyć aktywność amylazy śliny wyrażając ją liczbą równą ilości ml 1 % roztworu skrobi rozłożonej w ciągu 30 minut.

Obliczenie wyników - przykład

Przypuśćmy , ze stadium dekstryn nie dających zabarwienia z jodem , wystąpił już w probówce trzeciej. Ilość skrobi 1% w tej probówce równa jest 2 ml, czyli w probówce 3-ciej po 30 minutach nastąpił rozkład 2-ch ml 1% roztworu skrobi. Ponieważ ta probówka zawierała 0,1 ml śliny otrzymujemy proporcję:

0,1 ml śliny rozkłada po 30 minutach ->    2 ml 1% skrobi

1 ml śliny rozkłada po 30 minutach -> x ml skrobi

2 ml

X =    = 20 ml 1 % skrobi

0,lml

czyli 1 ml śliny rozłożył 20 ml 1% skrobi = 20 mg skrobi w czasie 30 minut. Aktywność amylazy wynosi więc 20 jednostek.