4640480890

KINETYKA SZYBKICH REAKCJI DWUCZĄSTECZKOWYCH 49

todzie tej wykonywane są dwa pomiary: dla badanej próbki i związku wzorcowego. W rezultacie otrzymujemy dwa równania (8) i (9). W obu pomiarach, D(t) i D_m(t), funkcja £(ż_wzb, A_em, t) powinna być taka sama, co jest założeniem podstawowym. Dodatkowo zakłada się, że zanik fluorescencji dla związku wzorcowego jest opisany funkcją jednowykładniczą, równanie (10). Biorąc odpowiednio splot funckji D{t) i D_m{t) z funkcją I_m{t) otrzymujemy [10, 30, 31]:

L(t)®D(t) = I„(t)®E(t)®I(t) = D_m(t)®I(t).    (12)

To właśnie równanie (12) stanowi punkt wyjścia omawianej metody. Jak widać, występuje tutaj wyrażenie I_m(t)®D(t) = D_m{t)®I(t), w którym nie znamy jedynie parametrów funkcji I(t).

Rozwiązując równanie (12) ze względu na D(t) przy dodatkowym założeniu, że I_m(t) opisana jest równaniem (10), otrzymuje się:

(13)

Stosując metodę najmniejszych kwadratów na podstawie równania (13) można wyznaczyć parametry opisujące funkcję / (t). W metodzie DFCM nie wyznacza się więc wartości funkcji aparaturowej £(r), w przeciwieństwie do metod poprzednio omawianych.

2. PROCEDURY POMIAROWE

W celu wyznaczenia na podstawie równania (1) parametrów opisujących rzeczywistą funkcję zaniku fluorescencji, /(t), konieczne jest wykonanie dwóch pomiarów: jednego dla badanej próby i drugiego dla związku wzorcowego (w szczególnych sytuacjach wzorzec zastępuje się związkiem rozpraszającym światło lub zwierciadłem). Dopiero te dwa pomiary pozwalają na badanie rzeczywistego zaniku fluorescencji badanej próby. Niestabilności w pracy aparatury mogą wywoływać efekty wpływające w różny sposób na zniekształcenie lub względne przesunięcie obserwowanych sygnałów D(t) i D_m(t) (D_r(£)) i w konsekwencji pogorszenie dokładności pomiarów. W skrajnych przypadkach może to doprowadzić do błędnego przypisania rzeczywistej funkcji zaniku fluorescencji I(t) i błędnego zinterpretowania mechanizmu zaniku fluorescencji. W pracach [5, 10, 12, 30, 33] stwierdzono m.in., że:

—    funkcja aparaturowa £(t) zależy od długości fali światła wzbudzającego i długości fali światła emitowanego,

—    funkcja aparaturowa E(t) zależy od miejsca i powierzchni naświetlania

fotokatody,

—    monochromatory siatkowe wprowadzają błąd związany z dyspersją,

4 — Wiadomości Chemiczne 1-2/98