Cytometria przepływowa

Karolina Wychowska

Cytometria przepływowa

• technika analityczna
• pozwala na pomiar rozproszonego światła

lub sygnałów fluorescencji emitowanych
przez odpowiednio naświetlone komórki

• pozwala ocenić zarówno jakościowo, jak i

ilościowo właściwości fizyczne i biologiczne
komórek oraz niektórych ich komponentów

• odkryta jako ulepszenie mikroskopu

fluorescencyjnego

Cytometry przepływowe-

analizatory

• ocena ekspresji

antygenów

powierzchniowych i

wewnątrzkomórko

wych (np. cytokin,

hormonów)

• ocena aktywności

enzymów (np.

kinaz, kaspaz)

• ocena ekspresji

genów i

transkrypcji mRNA

dla różnych

produktów

komórkowych

Cytometry przepływowe-

sortery komórkowe

• zbieranie i analizowanie

danych o przepływających

komórkach,

• sortowanie - odchylania

płynących cząstek zgodnie z

różnicami ich potencjału

elektrycznego

• wykorzystywane są do

izolacji bardzo rzadkich

komórek, takich jak

zawieszone w krwi komórki

nowotworowe, erytrocyty

płodowe, czy też komórki

zmodyfikowane genetycznie

• znalazły zastosowanie przy

przeszczepach oraz

zapłodnieniach

pozaustrojowych

Schemat budowy cytometru

• Filtry dichroiczne odbijają fale krótkie i pozwalają na transmisję

fal długich; filtry środkowoprzepustowe przepuszczają jedynie

światło z bardzo wąskiego zakresu długości fali. Użycie

właściwych filtrów pozwala stwierdzić obecność określonych

znaczników w badanej próbce

Zasada działania cytometru

przepływowego

• znakowane komórki formowane są w cienki

strumień, który z odpowiednią prędkością

przesuwa się w stronę strefy pomiaru

• każda pojedyncza cząstka naświetlana jest

zogniskowaną wiązką laserową

• światło ulega rozproszeniu i jednocześnie

wzbudza przyłączone do komórek

fluorochromy

• powstałe sygnały mierzone są za pomocą

odpowiednich detektorów, przemieniane na

impulsy elektryczne, wzmacniane i przesyłane

do komputera celem dalszej obróbki,

przechowywania i analizy.

Zasada działania cytometru

przepływowego

• Zawieszone

w cieczy
komórki
przechodzą
przez wiązkę
światła i
emitują
charakterysty
czne dla
siebie
sygnały

Wykorzystanie cytometrii

przepływowej

• ocena immunofenotypu

• badanie cyklu mitotycznego komórek

nowotworowych

• określanie tzw. oporności wielolejkowej

• diagnostyka niektórych chorób

autoimmunizacyjnych

• szybkie wykrywanie i wstępna identyfikacja

mikroorganizmów

• oznaczanie ludzkich antygenów

leukocytarnych

• analiza wielkości i ziarnistości komórek oraz

odzwierciedlanie etapu cyklu podziałowego

• ocena efektywności terapii odczulającej

Bibliografia

• Anna Kurcek , Cytometria przepływowa [online],

[dostęp: 18 stycznia 20013], Dostępny w

Internecie:

http://www.e-biotechnologia.pl/Artykuly/Cytometr

ia-przeplywowa/

• Baran J., 2008. Nowa epoka cystometrii

przepływowej - przewodnik po współczesnych

cytometriach i ich zastosowanie. Postępy Biologii

Komórki 35 (24): 3-15.

• Kaczmarek A., Mackiewicz A., Leporowska E.,

Osawa T., 2002. Rola i miejsce cytometrii

przepływowej w diagnostyce

klinicznej.Współczesna Onkologia 6 (6): 366-373.