Metodydania komórek

Metody badania komórek:


1. CYTOCHEMICZNE - mikroskopy
- zachowanie struktury
- wykrywają i lokalizują subst. ‘in situ’ (bez naruszenia jego struktury)

(immunocytochemia, hybrydocytochemia, autoradiografia,

metody mikroskopowe, cytochemia klasyczna)

2. BIOCHEMICZNE - ilościowa zawartość substancji i jej charakterystyka

- niszczenie struktur

- wykrywają substancje w wyciągach/homogenatach

(frakcjonowanie, elektroforeza, chromatografia, PCR, sekwencjonowanie)

  1. Metody cytochemiczne – pozwalają na wykrycie i lokalizację badanych związków w kom. Zachowana zostaje struktura wewnętrzna komórek a produkty reakcji wykrywane są IN SITU, czyli w ich naturalnych lokalizacjach, przy użyciu mikroskopów. Produkt jest: widoczny, nierozpuszczalny i znajduje się w miejscu naturalnego występowania.

IMMUNOCYTOCHEMIA - DO WYKRYWANIA SUBSTANCJI - wysoka specyficzność metody. Wykorzystuje się: przeciwciała znakowane z np. fluorochromami, enzymami lub metalami ciężkimi (co pozwala na ich mikroskopową lokalizację).

Przy znakowaniu złotem (obserwacja w TEM).

HYBRYDOCYTOCHEMIA – DO WYKRYWANIA LOKALIZACJI DNA/RNA O OKREŚLONEJ SEKWENCJI – przy użyciu znakowanych fluorochromami, antygenami lub izotopami promieniotwórczymi Sondami (komplementarne łańcuchy).

AUTORADIOGRFIA (inna strona)

JAK ZROBIĆ IN SITU:
A/ utrwalić materiał (alkoholami, aldehydami kw.org. lub solami metali ciężkich) (niską temp./mikrofalami)
B/ odwadnianie i zatopienie materiału (w alkoholu i acetonie o rosnącym stęż.)(wprowadzenie parafiny/żywic akrylowych i epoxydowych). Przy mrożeniu ten etap pomijamy!
C/ krojenie (świetlny = 1-10ym) (elektronowy = 20-50 nm)

  1. Metody biochemiczne – badanie ilościowej zawartości substancji badanych. Materiał zwykle podlega homogenizacji komórek i często też frakcjonowaniu wirownikiem na warstwy ze wzrastającą prędkością.

FRAKCJONOWANIE (inna strona)

ELEKTROFOREZA (inna strona)

CHROMATOGRAFIA (inna strona)

PCR (Reakcja Łańcucha Polimerazy)

– namnażanie śladowych ilości kw.nukleinowych przy użyciu polimerazy DNA poprzez przeprowadzanie wielu replikacji djących setki/tysiące identycznych cząstek. Każdy cykl jest bardziej efektywny, gdyż ma więcej matryc. (Przy RNA najpierw przepisujemy materiał na DNA dzięki odwrotnej transkryptazie)

DO BADANIA: GENÓW, DNA mitochondrialnego/WIRUSOWEGO i w kryminologii.

SEKWENCJONOWANIE

- sekwencjonowanie monomerów (w b./kw.nukl.)

- odrywanie łańcucha (B.) lub dodawanie do niego (DNA) kolejnych monomerów i ich identyfikacja.

Mikroskop świetlny 1.000x (2D)

- ŚW. Widzialne – (V)

- rozdzielczość 0,2 ym

^, O, 2D, kolor

MODYFIKACJE:

M. kontrastowo fazowy

*LIVE – NO pigment

M. interferencyjny

* LIVE – 3D (kontrast Nomarskiego)

M. ciemnego pola

- efekt HALO (świetlna otoczka)

- obserwacja powierzchni kom/bakt.

M. fluorescencyjny

V i V~~> en.

Fluor. Pierwotna/autofluorescencja lub f.wtórna wywołana barwnymi fluorochromami.

M. konfokalny – (3D)

- V.laser

- b. ostry obraz

M. elektronowy TRANSMISTYJNY 1mln (2D)

> 0,2 nm

^, O, pozorny, cz-b.

M. elek. SKALINGOWY 250 K (3D)

> 5 nm

^, 3d, cz-b


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
(), mikrobiologia przemysłowa L, Metody?zintegracji komórek
Metody izolowania komórek
Metody barwienia i różnicowania komórek
metody dezintegracji komórek, studia, bio, 3rok, 6sem, biotechnologia, wyklad
Metody obserwacji komórek
28a BIOFIZYCZNE I BIOCHEMICZNE METODY BADANIA KOMÓREK
Ćwiczenie 2 Metody izolacji komórek
biofizyczne i biochemiczne metody badania komorek, MATURA, biologia notatki, biologia
Metody izolowania komórek
Metody wydajnej izolacji i hodowli mezenchymalnych komórek macierzystych
62 Antygeny różnicowania 63 Metody obserwacji komórek
T 3[1] METODY DIAGNOZOWANIA I ROZWIAZYWANIA PROBLEMOW
10 Metody otrzymywania zwierzat transgenicznychid 10950 ppt
metodyka 3
organizacja i metodyka pracy sluzby bhp

więcej podobnych podstron