Dominika Nynek

W-7 Ochrona Środowiska

Nr albumu: 186490

MIKROBIOLOGIA

SPRAWOZDANIE z ćw. nr 2 i 3.

Morfologia komórki bakterii, grzybów drożdżowych i pleśni oraz kolonii. Barwienie złożone.

1. Cel ćwiczenia.

Obserwacja mikroskopowa form przetrwalnych bakterii – endospor Bacillus sp. Zapoznanie się z morfologią komórki bakteryjnej oraz z sposobem barwienia preparatów metodą Wirtza – pozwalającą uwidocznić endospory ( struktury tworzone w celu ochrony przed warunkami niedoboru pożywienia, w tej fazie bytu komórki zanika metabolizm i wszelkie przejawy życia ) specyficzne dla danego rodzaju bakterii .

1. Cześć doświadczalna

   1. Wykonanie barwienia przetrwalników metodą Wirtza – zadanie 2

W tym ćwiczeniu przeprowadzono barwienie metodą Wirtza preparatu z szczepem Bacillus sp. Ta metoda barwienia polegała na zabarwieniu gotowego preparatu, z bakteriami zawierającymi edospory, zielenią malachinową i poddawaniu wysokim temperaturom zalanego tym barwnikiem preparatu i dodatkowemu zabarwieniu fioletem krystalicznym. Tak przygotowaną próbkę obserwowano przy powiększeniu 100x, zaś rysunek wykonany na podstawie obserwacji zamieszczono po niżej.

1. Wyniki rysunek z barwienia Wirtza bakterii Bacillus sp.

Rysunek 1. Bacillus cereus

1. Wnioski

Podczas pracy przy mikroskopie obserwowano Bacillus cereus zabarwioną za pomocą metody Wirtza dzięki czemu można było obserwować formę przetrwalną tej bakterii gramdodatniej o kształcie laseczki. Endospory były ułożone centralnie a niektóre komórki były wybrzuszone w miejscu powstania endospory . Jednak większość edospor była pozbawiona ściany komórkowej – komórka została całkowicie zniszczona i pozostała sama endospora.

1. Cel ćwiczenia.

Obserwacja mikroskopowa morfologii drożdży i pleśni, zarodników grzybów oraz mierzenie komórek grzybowych za pomocą okularu mikrometrycznego. Poznanie sposobu przygotowywania preparatu przyżyciowego i barwienia grzybów, różnic pomiędzy drożdżami a bakteriami, podstawowych rodzajów pleśni (pleśniak, rozłożek, pędzlak, kropidlak), charakterystyki drożdży właściwych, grzybów drożdżoidalnych oraz pleśni. Obserwacja kolonii grzybów.

1. Cześć doświadczalna

4.2 Barwienia komórek drożdży Saccharomyces cerevisiae za pomocą fioletu krystalicznego – zadanie 1

Wykonano barwienie komórek drożdży Saccharomyces cerevisiae i Candida lyxosophila za pomocą fioletu krystalicznego. W tym celu przygotowano preparat utrwalony termicznie. Użyty sposób barwienia jest określany jako prosty, pozytywny gdyż został zabarwiony obiekt, za pomocą jednego barwnika. Fiolet krystaliczny zatrzymywany jest przez ścianę komórkową o specyficznej budowie. Przygotowywane preparaty badano przy powiększeniu 40x pod mikroskopem, a gotowe rysunki z obserwacji zamieszono po niżej.

4.3 Wyniki – rysunki z barwienia komórek drożdży Saccharomyces cerevisiae i Candida lyxosophila

Rysunek 1. Saccharomyces cerevisiae

Rysunek 2. Candida lyxosophila

4.4 Wnioski

Przy obserwacji eukariotycznych komórek drożdży piekarskich Saccharomyces cerevisiae zauważono komórki tworzące krótkie nitki połączonych ze sobą komórek w procesie pączkowania – charakterystycznego dla grzybów sposobu rozmnażania bezpłuciowego, jednak pączkowanie nie doszło do końca i komórki potomne nie rozdzieliły się przez co powstała formy przypominające pseudogrzybnię – co jest specyficzną cechą często występującą u grzybów drożdżoidalnych.

Zaś Candida lyxosophila to także gatunek należący do drożdży właściwych. Podczas badań zaobserwowano podobnie jak w przypadku drożdży piekarskich pączkujące komórki lecz tworzyły one o wiele dłuższe i bardziej rozgałęzione nitki połączonych w procesie pączkowania komórek – zatem tworzyły formę przypominającą strzępki grzybni – pseudogrzybnię.

4.5 Obserwacja zarodników workowych (askospor) drożdży Saccharomyces cerevisiae w preparacie przyżyciowym – zadanie 2

Preparat przygotowywany do tego ćwiczenia to przyżyciowy zatem drożdże wykorzystane do badań pozostają żywe. Z kolej przy wykonaniu tego zadania nie jest potrzebne barwienie a komórki są pozostawiane w kropli wody. Obserwacji dokonano przy powiększeniu 40x po czym wykonano rysunki, które zamieszczono poniżej

4.6 Wyniki – rysunek z zarodnikami drożdży Saccharomyces cerevisiae - (askospor).

Rysunek 1. Saccharomyces cerevisiae - askospory

4.7 Wnioski

Drożdże właściwe z gromady workowców do których należy Saccharomyces cerevisiae zgodnie z nazwą gromady wytwarzają zarodnie workowe czyli worki, w wnętrzu których znajdują się askospory – zarodniki workowe. Jest to charakterystyczny dla tej gromady grzybów sposób rozmnażania płciowego. Owe worki z askosporami były trudne do zaobserwowania gdyż w pobranym szczepie było ich niewiele – obene w preparacie komórki drożdży rozmnażały się głównie na drodze bezpłciowej czego efektem były widoczne blizny po pączkowaniu.

4.8 Pomiar wielkości komórek grzybowych (drożdży i pleśni) za pomocą okularu mikrometrycznego –zadanie 5

Ćwiczenie te polegało na dokonaniu pomiaru wielkości komórek grzybowych za pomocą wykalibrowanego mikromeru nastawionego na okular przy powiększeniu obiektywu 100x dzięki czemu możliwe jest obliczenie rzeczywistej wielkości komórki na podstawie odczytanych wartości.

4.9 Wyniki – wymiary komórki Saccharomyces cerevisiae

- Pomiary:

L₂ = 3,5 mm = 3500 μm

L₁ = 2,79 mm = 2790 μm

ΔL = L₂ – L₁ = 3500 μm -2790 μm = 710 μm

-Rzeczywista wielkość komórki:

X = $\frac{L}{P}$ ; gdzie P – powiększenie obiektywu.

X = $\frac{710\mu m}{116} = 6,12\ \mu m$

4.10 Wnioski

Z obliczeń wynika, że obserwowana komórka z gatunku Saccharomyces cerevisiae ma wielkość rzędu 6, 12 μm czyli jest już nieco większa niż typowa komórka bakteryjna która osiąga zazwyczaj wielości od 0,1 μm do 5 μm. Co jest zrozumiałe, gdyż zazwyczaj komórki eukariotyczne są większe od bakteryjnych.

4.11 Opis morfologii kolonii grzybowych – zadanie 6

Wybrano jedną kolonię niezidentyfikowanego gatunku spośród wcześniej posianych i wyrosłych na szalce Petriego z pożywką Sabouraud’a. Następnie przeprowadzono obserwacje a ich wyniki zamieszczono poniżej.

4.12 Wyniki – rysunki kolonii niezidentyfikowanego gatunku grzyba

4.13 Wnioski

Obserwowane kolonie niezidentyfikowanego gatunku grzyba to zapewne pleśnie, które wytwarzają tzw. grzybnię powietrzną czyli luźno skupione strzępki tworzące grzybnię. Charakterystyczne też jest dla tych grzybów też to, że owa grzybnia może mieć różnorodne zabarwienie np. zielone czy białe a wytworzone przez nią skupienia mają watowatą strukturę. Dodatkowo wytwarza zarodniki, a wyrasta z wrośniętej w podłoże grzybni wegetatywnej, z której pobiera substancje odżywcze. Rosnąc koncentrycznie przybiera tym ciemniejszą barwę im jest starsza – więc jej biała część na brzegu jest najświeższa.

Na płytce zaobserwowano kilka skupisk grzyba (w tym dwa połączone), które miały kształt okrągły, Jedna była niewielka, a pozostałe trzy dużo większe. Natomiast ich brzeg był falisty, o powierzchni puszystej na wierzchu, a spod spodu skórzastej i tworzyły koncentryczne strefy – najmniejsza kolonia miała na środku czarną barwę obtoczoną na brzegu strefą białą. Z kolej jedna ze struktur wyrastająca z drugiej była cała biała, a w pozostałych obserwowano stopniowo przechodzącą barwę z centralnej strefy – zielono żółtej do niebieskawo zielonej, aż do białej. Natomiast na spodzie kolonie były białe. Należy także stwierdzić, że kolonie były nieprzejrzyste o lekko wybrzuszonym wzniesieniu.