Prelekcja 8:
1. Krzyżówka z grupami krwi, zrobić dla AB, B i noworodka z gr 0.
2. BTA + zastosowanie.
BTA( bezpośredni test antyglobulinowy):

- używamy w tym teście 4 probówek. Dokonujemy próby badanej, autokontroli, kontroli dodatniej, kontroli ujemnej

- w etapie I do probówek dodajemy po dwie krople: 1 i 2 zawiesiny krwinek badanych( w PBS), 3 zawiesiny krwinek wzorcowych uczulonych grupy 0 Rh+, 4 zawiesiny krwinek wzorcowych uczulonych(?) grupy 0 Rh-. Krwinki wzorcowe z grupy 0 są uczulone przeciwciałami anty0D

- po wirowaniu i odsączeniu nadmiaru PBS na ligninie, dodajemy w II etapie po dwie krople: surowicy antyglobulinowej do probówki 1,3,4 oraz roztworu PBS do probówki 2

- dokładnie mieszamy przez wstrząsanie, wirowanie, odczytujemy wyniki( ewentualne aglutynacje)

Zastosowanie:

- podejrzenie choroby hemolitycznej u płodów i noworodków- materiał badany od noworodka lub płodu

- w podejrzeniu niedokrwistości autoimmunohemolitycznych

- u biorców krwi w badaniu powikłań poprzetoczeniowych

PTA-PEG( pośredni test antyglobulinowy):

- używamy tutaj 6 probówek. Probówka 1,2,3- wykrywanie alloprzeciwciał odpornościowych. Probówka 4- autokontrola. Probówka 5- kontrola dodatnia. Probówka 6- kontrola ujemna.

- w I etapie dodajemy po dwie krople: surowicy badanej do 1,2,3,4 oraz standardu anty-D do 5,6

- w II w etapie dodajemy po dwie krople zawiesiny:

* do 4 krwinek badanych

* do 1 i 5 krwinek wzorcowych grupy 0 Rh+ CCDee

* do 2 krwinek wzorcowych grupy 0 Rh+ ccDEE

* do 3 i 6 krwinek wzorcowych grupy 0 Rh- ccddee K

- do wszystkich probówek dodajemy cztery krople odczynnika PEG( glikol polietylenowy), przemywamy roztworem PBS, odsączamy nadmiar na ligninie

- dodajemy po dwie krople surowicy antyglobulinowej monoswoistej anty-IgG

-mieszamy, wirujemy, odczytujemy wyniki

Zastosowanie:

- wykrywanie alloprzeciwciał przed transfuzją

- wykrywanie autoprzeciwciał

- stosowanie testu przy podejrzeniu choroby hemolitycznej płodu i noworodka, czyli zarówno podczas ciąży jak i po porodzie- materiał badany pobieramy od matki

3. Metody służące do oznaczania antygenu D ukl Rh.

- testy enzymatyczne( pośredni i bezpośredni test papainowy)

- test antyglobulinowy pośredni( PTA-LISS[?])

- metody genetyczne

- mikrometody w żelu

- metody z użyciem odczynnika monoklonalnego

4. Próba krzyżowa.

Próba zgodności serologicznej wykonuje się przed każdym przetoczeniem krwi, natomiast próbę krzyżową wykonuje się przed transplantacją.

Próba zgodności serologicznej- polega na oznaczeniu antygenów na krwinkach w układzie AB0 dawcy i biorcy, następnie oznaczenie antygenu D u biorcy, a u dawcy tylko wtedy jeśli biorca jest Rh-. Kolejno wykonujemy próbę zgodności surowicy biorcy i krwinek dawcy w teście PTA-LISS oraz LEN. Następnie wykonujemy badanie w kierunku obecności alloprzeciwciał odpornościowych w surowicy biorcy w teście LEN i PTA-LISS. Ostatecznie wyniki weryfikujemy przy „łóżku chorego”, do tego celu służą karty do szybkiej kontroli grupy krwi. Stosujemy odczynniki monoklonalne.

Ustalanie zgodności tkankowej dawcy i biorcy:

- zgodność w głównych grupach krwi AB0

- typowanie tkankowe w celu określenia HLA

- próba krzyżowa- wykonywana w celu określenia, czy surowica biorcy zawiera przeciwciała przeciwko HLA dawcy- można wykonać test limfocytotoksyczny z wykorzystaniem limfocytów dawcy jako komórek docelowych dla przeciwciał obecnych w surowicy biorcy.

prelekcja 8:
1. Rozpisać grupy krwi... różne wariany w tym że u noworodków etc. 
2. Profilaktyka konfliktu serologicznego: co robimy, dlaczego, co to powoduje? 
- w 12 tygodniu oznaczamy grupę krwi matki w układzie AB0 i Rh oraz wykonujemy PTA. Jeżeli w PTA alloprzeciwciała odpornościowe są ujemne to po porodzie u kobiet Rh- znowu oznacza się testem PTA-LISS te alloprzeciwciała. Monitorowanie następnej ciąży

- nawet w przypadku testu ujemnego podaje się matce surowicę anty-D do 72h po porodzie, czyli każdej matce Rh- po porodzie podaje się surowicę anty-D. Blok epitopów na erytrocytach dziecka, które dostały się do krążenia matki+hamowanie odpowiedzi humoralnej przez przekazanie sygnału supresyjnego limfocytom B poprzez FcγRIIB.

3. Odczyn antyglobulinowy pośredni/bezpośredni: zastosowanie, wykonanie, przydatność.