Fermantacja mlekowa lab 1

Ćwiczenie 3-6

Bakterie fermentacji mlekowej i ich wykorzystanie w przemyśle

Część II

1. Analiza mikrobiologiczna fermentacji mlekowej:

1.1. Oznaczanie ogólnej liczby bakterii metodą bezpośredniego liczenia (metoda Breeda)

Technika sporządzania preparatów do metody Breeda:

- szkiełko podstawowe odtłuścić, markerem na szkiełku zaznaczyć kwadrat 1x1 cm (od spodu),

- na zaznaczonej powierzchni wykonać rozmaz z przefermentowanego mleka wykalibrowanym oczkiem ezy (0,001 cm³),

- preparat suszyć na powietrzu, a następnie utrwalić w płomieniu palnika,

- preparat odtłuścić zanurzając w mieszaninie chloroformu z eterem w stosunku 1:1. pozostawić do wyschnięcia.

- barwić błękitem metylenowym (około 2 minut), po czym nadmiar barwnika spłukać delikatnie wodą,

- wysuszony preparat oglądać pod imersją.

- obliczyć liczbę bakterii, przynajmniej w 20 polach widzenia, wg podanego wzoru:

X = 1000 i x a [kom/cm³]

gdzie:

X - liczba bakterii w 1 cm’’

i - średnia liczba bakterii w 1 polu widzenia

a - liczba powierzchni pól widzenia jaka mieści się w 1 cm² (3000)

1.2 Ocena efektów fermentacji mlekowej.

• (IQ

1.2.1 Po inkubacji zaobserwować i opisać zmiany w probówkach: wysokość powstałego skrzepu, je konsystencję, gazowanie, oraz zmiany zabarwienia papierków wskaźnikowych: kolor niebieski papierka lakmusowego świadczy o obecności NH;„ a zaczernienie papierka ołowianego o obecności H₂S.

Wykonać preparaty mikroskopowe z poszczególnych próbek barwione metodą Grama. Technika sporządzania preparatu metoda Grama

- wykonać rozmaz na odtłuszczonym, opisanym szkiełku podstawowym niewielkiej ilości produktu,

- barwić preparat fioletem krystalicznym przez 2-3 minuty.

- spłukać barwnik wodą.

- baruać preparat płynem Lugola przez 1 -2 minuty,

- spłukać barwnik wodą,

- odbarwić preparat za pomocą mieszaniny aceton-etanol przez ok. 15-20 sekund,

- spłukać preparat wodą,

- barwić fuksyną przez 30 sekund

- spłukać wodą,

- preparat wysuszyć (bibuła) oglądać pód imersją

- zanotować kształt i obecność drobnoustrojów G+ lub G-1.3. Oznaczenie zawartości kwasu mlekowego.

Każdą probówkę dokładnie wymieszać i odmierzyć po 5 cnT przefermentowanego mleka, a następnie miareczkować 0.1N NaOH wobec fenoloftaleiny do pierwszego trwałego, różowego zabarwienia.

Wyliczyć kwasowość ogólną w przeliczeniu na kwas mlekowy - wynik podać w %.