Do bulionu dodać agar i całość ogrzewać w parze bieżącej aż do rozpuszczenia. Następnie pożywkę przesączyć na gorąco przez sączek z waty i rozlać do kolb po 100 cm3. Do każdej kolby dodać po 1 g laktozy i 3,7 cm3 błękitu chińskiego. Całość wymieszać i wyjaławiać w temperaturze 117°C przez 20 min. pH gotowej pożywki powinno wynosić 7,4.
Pepton - 10 g Chlorek sodu - 5 g Glukoza - 5 g
Wyciąg z wątroby - 1000 cm3 Kostki wątroby
Przygotowanie wyciągu z wątroby. Wątrobę gotować przez 30 min. z wodą wodociągową w stosunku 1 kg wątroby na 2200 cm3 wody. Wyciąg przesączyć przez płótno i wyjaławiać przez 20 min. w temp. 121 ”C.
Przygotowanie wątroby w kostkach. Wątrobę ugotowaną w sposób podany wyżej pokrajać w kostki, zalać 0,85% roztworem chlorku sodu i wyjaławiać w temp. 121 'C przez 20 min.
Przygotowanie właściwej pożywki. Rozpuścić pepton i chlorek sodu w wyciągu, doprowadzić pH do 8,2, gotować 20 min. w temp. 121 ”C i przesączyć przez bibułę. Dodać glukozę, rozlać do probówek, do których uprzednio włożono pokrajaną w kostki wyjałowioną wątrobę (po 2 kostki objętości ok. 0,5 cm3 każda), pokryć jałowym płynnym olejem parafinowym i sterylizować w temp. 117 ° C przez 30 min. pH gotowej pożywki powinno wynosić 7,4-7,6.
Bulion zwykły (p. 1.4) - 1000 cm3 Agar - 15 g
Jałowe mleko odtłuszczone - 1 cm3 na 100 cm3 pożywki Glukoza, roztwór wodny 25% - 0,4 cm3 na 100 cm3 pożywki Przygotowanie jałowego odtłuszczonego mleka. Mleko wyjaławiać w temperaturze 121 ”C przez 5 min.
Przygotowanie pożywki. Do 1000 cm3 bulionu dodać 15 g agaru i ogrzewać w parze bieżącej aż do rozpuszczenia. Przesączyć przez sączek z waty, rozlać po 100 cm3 i wyjaławiać w temp. 120°C przez 20 min. Do rozpłynnionego i ostudzonego do 50 ° C agaru bulionowego dodać na każde 100 cm3 pożywki, 1 cm3 jałowego mleka oraz 3,4 cm3 roztworu glukozy. pH pożywki powinno wynosić 7,0.
1.13. Żelatyna odżywcza Bulion (p. 1.4) - 1000 cm3 Żelatyna - 150 g
Do bulionu dodać żelatynę i rozpuścić ją w łaźni wodnej albo przez ogrzewanie w parze bieżącej. Ustalić pH na poziomie 7,3, roztwór przesączyć przez watę lub bibułę, rozlać do probówek lub kolb i sterylizować przez 20 min. w temperaturze 117°C albo przez 3 kolejne dni po 30 min. w temp. 100 ”C.
Chlorek sodu - 9 g Tiosiarczan sodu - 0,5 g Woda destylowana - 1000 cm3
Po rozpuszczeniu składników przelać roztwór do kolb lub butelek i wyjaławiać w temp. 121 'C przez 20 min.
Uwaga. Niektóre firmy w Polsce, jak np. Wytwórnia Surowic i Szczepionek w Warszawie albo Wytwórnia Czystych Kultur w 01-sztynie-Kortowie produkują gotowe suche pożywki standardowe. Przygotowanie pożywek w tych przypadkach jest proste i polega na zmieszaniu suchej pożywki z odpowiednią ilością wody destylowanej, zgodnie z przepisem umieszczonym na opakowaniu.
2. BARWNIKI I ODCZYNNIKI
Fiolet krystaliczny - 0,4 g Alkohol etylowy 95% - 10 cm3 Fenol, 1% roztwór wodny - 100 cm3
Fiolet krystaliczny rozpuścić w alkoholu etylowym, a następnie dodać roztwór wodny fenolu i całość dokładnie wymieszać.
162
163