3110399268

Ćwiczenie 10. Metody izolacji i rozdziału kwasów nukleinowych.

Rys. 10.3. Struktura kompleksu białko - SDS

postać utleniona białka

mieszane mostki dwusiarczkowe

postać zredukowana białka

R-SH to 2-merkaptoetanol

HO-C-C-SH H₂ h₂

Rys. 10.4. Schemat procesu redukcji wiązań dwusiarczkowych w cząsteczce białka przy udziale 2-merkaptoetanolu.

2.2 Elektroforeza w żelach agarozowych

Agaroza jest to polisacharyd otrzymywany z glonów morskich, który w środowisku wodnym tworzy żel o konsystencji stałej. Mniej oczyszczona agaroza (agar) wykorzystywana jest jako podstawa większości stałych podłoży mikrobiologicznych (w mniejszym stopniu żelatyna i żel krzemionkowy). Czysta agaroza jest tworzącym ziarna, poprzecznie usieciowanym biopolimerem D-galaktozy i 3,6-anhydro-Z.-galaktozy. Sita molekularne agarozy wykazują dobre własności rozdzielcze. Dodatkową zaletą są jej względnie niskie temperatury topnienia (około 60°C) i krzepnięcia (około 45°C).

Żele agarozowe o różnym stężeniu (0,5 - 2 %) stosuje się standardowo do rozdziału fragmentów DNA od 0,2 do około 50 kb. Większe fragmenty DNA, nawet całe chromosomy mogą być rozdzielane w żelu agarozowym metodą elektroforezy pulsacyjnej (zmienny okresowo kierunek przepływu prądu), zaś bardzo małe fragmenty w specjalnych typach agarozy.

www.ichip.pw.edu.pl/pilarek/biochemia