prep biomol skrypt4

Do określenia objętości rozpuszczalnika (eluentu) wypełniającego przestrzenie miedzy granulkami żelu (Vo) służy Blue Dextran 2000 (Mr ~ 2 000 000 Da). Dodatkowym walorem Blue Dejctranu jest wykazywanie prawidłowości upakowania kolumny żelem (Rys. 2)

Rys. 2 Określenie prawidłowości napełnienia kolumny: A - prawidłowo napełniona kolumna, B - nierówna sedymentacja żelu (wywołana np. gradientem temperatur w poprzek kolumny) lub napełnienie kolumny przy niepionowym jej ustawieniu, C - najczęściej na skutek nierównej powierzchni żelu, D - pakowanie kolumny zbyt rzadką mieszaniną żelu

Całkowitą objętość kolumny wypełnionej żelem wyraża wzór:

Vt = Vo + Vi + Vg

gdzie:

Vo - tzw. objętość zerowa (objętość rozpuszczalnika między granulkami żelu)

Vi - objętość rozpuszczalnika związanego z żelem Vg - objętość matrycy żelu

W sączeniu molekularnym wyróżnia się dwie fazy: ruchomą - rozpuszczalnik wypełniający przestrzenie miedzy granulkami żelu (Vo), i stacjonarną - woda związana z matrycą żelu (Vi).Jeżeli współczynnik podziału między obie fazy oznaczyć Kd, to objętość elucyjną (Ve), tzn. objętość eluatu przy której dana substancja pojawi się w najwyższym stężeniu wyraża równanie:

Ve = Vo + K_Dx Vi

Dla bardzo dużych cząsteczek (np.Blue Dextran) współczynnik Kd przyjmuje wartość zero i wówczas objętość elucyjną równa się objętości zerowej.