prep biomol skrypt6

Wyznaczanie mas cząsteczkowych białek

1.    Wykonać pomiar spektrofotometryczny otrzymanych frakcji (Blue Dexlran przy 620 nm, białka standardowe przy 280 nm) wobec eluentu

2.    Wyznaczyć Vo (objętość przy której pojawiło się najwyższe stężenie Blue Dextranu).

3.    Wyznaczyć Ve (objętość eluatu, przy którym dana substancja pojawi się w największym stężeniu) standardów mas cząsteczkowych.

4.    Obliczyć stosunek Ve/Vo.

5.    Na papierze logarytmiczno liniowym odłożyć na osi odciętych znane masy cząsteczkowe standardów, natomiast na osi rzędnych odłożyć wartości stosunku Ve/Vo. Następnie poprowadzić prostą przez wyznaczone punkty.

6.    Z krzywą kalibracyjnej odczytać masę cząsteczkową badanego białka

Literatura:

„ćwiczeniaz biochemii” J. Strzeżek, A. Wołos

,, Techniki chromatografii cieczowej " B. Walkowiak

,,Protein purification ” Jan-Chryster Janson, Lars Ryden