7862365980

EP 2 034 830 BI

torowy - wzmacniacz CMV/promotor AdMLP lub element regulatorowy - wzmacniacz SV40/promotor Ad-MLP) do prowadzenia transkrypcji genów na wysokich poziomach. Rekombinowany wektor ekspresyjny niesie również gen dhfr, który umożliwia selekcję komórek CHO, które zostały stransfekowane wektorem, przy użyciu selekcji/amplifikacji na metotreksacie. Wybrane transformanty komórek gospodarza hoduje się w celu umożliwienia ekspresji łańcuchów ciężkich i lekkich przeciwciała i nienaruszone przeciwciało odzyskuje się z podłoża hodowlanego. Standardowe techniki biologii molekularnej są stosowane do wytworzenia re-kombinowanego wektora ekspresyjnego, do transfekcji komórek gospodarza, do wyselekcjonowania trans-formantów, do hodowli komórek gospodarza i do odzyskiwania przeciwciał z podłoża hodowlanego.. Na przykład, niektóre przeciwciała mogą być izolowane chromatografią powinowactwa do białka A lub białka G.

[0091]    Przeciwciała mogą również zawierać modyfikacje, np. modyfikacje, które zmieniają funkcję Fc, np. w celu obniżenia lub usunięcia oddziaływania z receptorem Fc lub C1q, lub z oboma. Na przykład, ludzki region stały lgG1 może być zmutowany w jednej lub więcej reszt, np. jednej lub więcej reszt 234 i 237, np. zgodnie z numeracją w pat. US nr 5,648,260. Inne przykładowe modyfikacje obejmują te opisane w pat. US nr. 5,648,260.

[0092]    Dla niektórych białek, które zawierają domenę Fc, system wytwarzania przeciwciała/białka można zaprojektować do syntetyzowania przeciwciał lub innych białek, w których region Fc jest glikozylowany. Na przykład, domena Fc cząsteczek IgG jest glikozylowana przy asparaginie 297 w domenie CH2. Domena Fc może również zawierać inne eukariotyczne potranslacyjne modyfikacje. W innych przypadkach, białko jest wytwarzane w postaci, która nie jest glikozylowana.

[0093]    Przeciwciała mogą być także wytwarzane przez transgeniczne zwierzę. Na przykład, pat. US nr 5,849,992 opisuje sposób wyrażania przeciwciała w gruczole sutkowym transgenicznego ssaka. Transgen jest skonstruowany tak, że obejmuje promotor specyficzny dla mleka i sekwencje kwasu nukleinowego kodujące przeciwciało będące przedmiotem zainteresowania, np. opisane tu przeciwciało i sekwencję sygnałową do wydzielania. Mleko wytwarzane przez samice takich transgenicznych ssaków zawiera wydzielane do niego białko będące przedmiotem zainteresowania, np. przeciwciało. Białko może być oczyszczone od mleka lub, dla niektórych zastosowań, stosowane bezpośrednio.

Inne ugrupowania

[0094]    Przeciwciała tu opisane mogą dalej zawierać inne ugrupowania dające pożądane funkcje. Na przykład, przeciwciała mogą obejmować ugrupowanie toksyczne (np. toksoid tężcowy lub rycyny) lub radionuklid (np. ¹¹¹ln lub ⁹⁰Y) do zabijania komórek docelowych przez przeciwciała (patrz np. patent US 6,307, 026). Przeciwciała mogą zawierać ugrupowanie (np. biotynę, ugrupowania fluorescencyjne, ugrupowania radioaktywne, znaczniki histydynowe itd.) dla łatwiejszej izolacji lub detekcji. Przeciwciała mogą także zawierać ugrupowanie, które może przedłużyć ich okres półtrwania w surowicy, na przykład, ugrupowanie glikolu polietylenowego (PEG).

Urazy niedokrwienne

[0095]    Niedokrwienie odnosi się do zmniejszenia lub zniesienia dostarczania krwi do tkanki. Sposoby tu opisane mogą być stosowane do leczenia urazów związanych z niedokrwieniem lub "urazów niedokrwiennych". Urazy niedokrwienne mogą obejmować obrażenia, np. nerki, wątroby, płuc, trzustki, mięśnia szkiele-

16